禽腺病毒四型重组病毒和鸭腺病毒三型重组病毒的构建

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禽腺病毒血清四型(FAdV-4)是肝炎-心包积水综合征(HPS)的主要病原,HPS引起感染鸡心包积水和肝脏坏死,具有发病率高、无季节性、死亡率高的特点,近年来在我国多省均有报道,且感染率逐年上升。因此研究FAdV-4的基因功能、致病机制和减毒机理,为构建更安全有效的禽腺病毒载体疫苗奠定基础具有现实意义。本研究以2015年分离得到的FAdV-4高致病性毒株CH/HNJZ/2015为亲本株,构建了在其基因组1966bp缺失突变处插入炎症因子IL-1β的受体拮抗剂IL-1Ra基因的重组质粒,将重组质粒转染鸡肝癌细胞,成功拯救出重组病毒rHNJZ-IL-1Ra-1966。对比重组病毒和亲本毒株的复制动态,IL-1Ra基因的插入不影响重组病毒的体外复制,同时免疫印迹实验和连续传代结果表明成功构建了能稳定表达IL-1Ra蛋白的重组禽腺病毒rHNJZ-IL-1Ra-1966。
  2014年,在我国广东一番鸭厂发生了以肝脏出血、肿大和坏死为特征的新型疫病,从发病番鸭体内纯化到一株病毒CH-GD-12-2014,全基因组序列分析和进化树分析表明该病毒属于禽腺病毒属,纤维蛋白基因和六邻体基因比对结果表明该病毒是一种新型的鸭腺病毒,命名为鸭腺病毒三型(DAdV-3)。近年来,DAdV-3在我国多地传播,虽致死率较低,但其在鸭群中阳性比例高、易二次感染,给家禽养殖行业造成重大经济损失,因此急需开发安全有效的防控手段以预防DAdV-3的感染。
  鸭甲型病毒性肝炎(DVHA)由鸭甲型肝炎病毒(DHAV)引起,DHAV感染情况复杂,常与其它鸭源病毒混合感染。目前DHAV广泛传播,不断出现新的变异株,为DVHA的防治带来了巨大挑战,实际生产中多在雏鸭感染后注射卵黄抗体来防控DHAV。因此开发安全有效的病毒载体疫苗以控制DVHA具有广阔的发展前景。本研究以DAdV-3毒株CH-GD-12-2014为亲本株,构建了表达DHAV-VP1蛋白的重组质粒,并成功拯救出重组病毒rDAdV3-DHAV-VP1。对比rDAdV3-DHAV-VP1和CH-GD-12-2014的生长曲线,DHAV-VP1的插入对重组病毒在感染初期的复制有一定影响,还需要进一步的实验来验证。免疫印迹实验结果验证了DHAV-VP1蛋白的表达,连续传代结果证明rDAdV3-DHAV-VP1具有良好的遗传稳定性。
  番鸭细小病毒病(MPVD)是由番鸭细小病毒(MDPV)引起的雏番鸭病毒性疾病,在我国南方多省均有发生,感染该病的雏鸭生长发育迟缓,给番鸭养殖场带来巨大的损失。MPVD的防控和免疫目前依靠灭活疫苗、弱毒疫苗的接种,因此在规避传统疫苗的缺点的基础上开发一种安全有效的病毒载体疫苗对MDPV进行有效防治,仍具有现实意义。本研究以DAdV-3毒株CH-GD-12-2014为亲本株,构建了表达MDPV-VP3蛋白的重组质粒,并成功拯救出重组病毒。重组病毒rDAdV3-MDPV-VP3的最高病毒滴度与亲本相近,免疫印迹实验验证了重组病毒中MDPV-VP3蛋白的表达。结果表明,成功构建了表达MDPV-VP3蛋白的重组鸭腺病毒rDAdV3-MDPV-VP3。
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