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目的:利用噬菌体随机12肽库技术,筛选系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者的血清,获得与SLE患者血清特异的噬菌体模拟肽,并通过噬菌体模拟肽的分析进一步了解SLE病原体感染情况,为进一步完善SLE血清学诊断和研究SLE发病机制等提供依据。
方法:收集SLE患者和正常人血清各30例。首先用正常人混合血清对噬菌体随机12肽库进行亲和筛选,去除与正常人血清特异的噬菌体肽,再用SLE患者混合血清作为筛选配基,进行亲和筛选、扩增,获得与SLE患者血清特异性结合的噬菌体克隆。用通过Dot-ELISA鉴定SLE血清结合的阳性噬菌体克隆,进而分别用SLE患者及正常人血清各12例进一步鉴定阳性噬菌体的混合克隆,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况。最后对鉴定为特异性噬菌体克隆进行序列测定与比对分析。
结果:筛选到与SLE患者混合血清特异结合的噬菌体阳性克隆17个;将上述17个阳性克隆混合,分别与SLE患者和正常人的个体血清反应,显示12例SLE患者个体血清均阳性,12例正常人个体血清均未出现阳性结果;随机选取Dot-ELISA鉴定为阳性的噬菌体克隆进行DNA序列测定,最终得到4个不同的氨基酸序列;通过BLAST软件进行相应的蛋白同源序列比对,结果发现这四个序列与人类抗原缺乏同源性,而与细菌、病毒、真菌、放线菌等病原体蛋白有一定同源性,而且,这四种序列与洋葱伯克霍尔德菌、迟缓爱德华杆菌、芽孢杆菌、不动杆菌蛋白有高度同源性。
结论:筛选和获得17个SLE特异性的噬菌体12肽,可以模拟SLE多种相关抗原表位与患者血清发生抗原抗体反应,为迸一步完善SLE血清学诊断提供依据;所获得的噬菌体多肽序列具有与某些病原体相似的同源性,提示SLE发病可能与病原体感染有关,为进一步了解SLE病原体感染情况及SLE的发病机制提供了线索。