瘦素、胰岛素及IGF-2对滋养细胞中PKB和PS6K蛋白表达的影响及信号传导途径

• 作 者: 王阳
• 机 构: 中国医科大学
• 出 处: 中国医科大学
• 发表日期: 2008年9期
• 关键词: 胎儿发育

目的：出生体重与成年疾病密切相关，大量研究表明影响出生体重的因素主要包括：营养因素、胎盘的结构和功能、生长因子以及激素。本研究通过瘦素、胰岛素及IGF—2对滋养细胞中PKB和P70S6K蛋白表达的影响，以及这一信号通路中PI3K的特异性抑制剂LY294002和mTOR的特异性抑制剂雷帕霉素(rapamycin)对PKB和P70S6K蛋白表达的调节作用，探讨瘦素、胰岛素及IGF—2对出生体重的影响是否同PI3K/PKB/mTOR信号途径存在联系。
方法：正常妊娠妇女进行人工流产手术时获取的绒毛组织，用0.25％胰酶4℃消化约40min。离心后加入25IU/ml DNaseⅠ作用10～15min。100目滤网过滤，用2.5％和1.25％的BSA密度梯度沉降45min，收集下层滋养细胞离心后接种于预先涂有Ⅰ型胶原的培养皿中。37℃含5％CO2湿度为99％的孵箱中培养。根据细胞生长情况2～3d换液一次。取生长状态较好的滋养细胞血清饥饿24小时后换成含10％胎牛血清的DMEM培养液，分别给与瘦素10nmo/L；胰岛素6nmol/L；IGF—225nmol/L作用24小时。另一组同时分别加入LY29400220umol/L；rapamycin100nmol/L作用24小时后收集细胞(5—6×106)备用。将收集的细胞按凯基全蛋白提取试剂盒步骤加提取液。考马斯亮蓝法蛋白定量，应用Western blot技术检测瘦素、胰岛素及IGF—2作用后滋养细胞中PKB和P70S6K的蛋白表达情况，以及LY294002和rapamycin对蛋白表达的影响。结果用gene tools from syngene凝胶图象分析系统分析。资料以均数±标准差(x±s)表示，结果采用SPSS13.0统计软件进行ANOVA检验，P<0.05为差异有统计学意义。
结果：⑴瘦素、胰岛素及IGF—2刺激组滋养细胞中PKB和P70S6K蛋白的表达同对照组相比明显增加(均P<0.05)。⑵瘦素、胰岛素及IGF—2刺激组分别加入LY294002和rapamycin，PKB和P70S6K蛋白的表达均明显降低(均P<0.05)。
结论：①瘦素、胰岛素及IGF—2可促进滋养细胞中PKB和P70S6K蛋白的表达，并且这种作用可被PI3K/PKB/mTOR信号传导通路的特异性抑制剂LY294002和rapamycin所抑制。②瘦素、胰岛素及IGF—2对出生体重的影响可能部分是通过PI3K/PKB/mTOR信号通路实现的。