【摘 要】
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目的:通过检测美托洛尔干预后G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在左室心肌肥大细胞中表达和定位的变化，阐明GRK2参与心肌肥大时细胞信号的传递、心肌纤维的合成与组装的调节，美托洛尔对肥大心肌细胞中GRK2的影响，探讨美托洛尔抑制心肌肥大的机制。方法:1、实验动物：6月龄WKY大鼠6只、6月龄SHHF大鼠18只购买于成都达硕科技有限公司。通过双盲设计，将6月龄SHHF大鼠随机等分为3组，1组6月龄SHH
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目的:
通过检测美托洛尔干预后G蛋白偶联受体激酶2(GRK2)在左室心肌肥大细胞中表达和定位的变化，阐明GRK2参与心肌肥大时细胞信号的传递、心肌纤维的合成与组装的调节，美托洛尔对肥大心肌细胞中GRK2的影响，探讨美托洛尔抑制心肌肥大的机制。
方法:
1、实验动物：6月龄WKY大鼠6只、6月龄SHHF大鼠18只购买于成都达硕科技有限公司。通过双盲设计，将6月龄SHHF大鼠随机等分为3组，1组6月龄SHHF大鼠(6M-SHHF)与6月龄WKY大鼠(6M-WKY)同时处死，分离心脏；剩余2组6月龄SHHF大鼠，其中1组予喂养2个月的美托洛尔25mg/kg/d(8M-SHHF-D)，另外1组单纯予喂养2个月的食物(8M-SHHF)，至8月龄时，将两组SHHF大鼠处死，分离心脏。2、蛋白质分离、电泳、和Western Blot方法：将左心室组织分别制成含有总蛋白、浆蛋白、膜蛋白和核蛋白的组织匀浆，检测GRK2在各组大鼠左心室不同组织匀浆中的表达。3、免疫荧光方法和共聚焦显微镜观察：采用对各组大鼠左心室冰冻切片的荧光免疫标记，通过共聚焦显微镜观察GRK2在心肌细胞亚细胞结构中的分布。4、统计学分析：利用SPSS13.0对四组大鼠进行单因素的方差分析，对两两大鼠间的差异进行LSD-t检验，对左心室重量与GRK2水平的进行相关分析。P＜0.05认为有显著性差异。
结果:
Western Blot结果显示：在左心室心肌组织总蛋白匀浆中，6月龄SHHF和WKY大鼠GRK2的表达无明显差异(P=0.58,n=6)，8月龄SHHF比6月龄SHHF大GRK2的表达明显增高(P＜0.001，n=6)，但8月龄SHHF美托洛尔药物组比同月龄SHHF非药物组大鼠GRK2的表达明显减少(P＜0.001，n=6)。在左心室心肌组织膜蛋白匀浆中，6月龄SHHF大鼠GRK2的表达增高(P＜0.001，n=6)，8月龄SHHF大鼠GRK2的表达进一步增高(P＜0.001，n=6)，8月龄SHHF美托洛尔药物组比同月龄SHHF非药物组大鼠GRK2的表达明显减少(P＜0.001，n=6)。免疫荧光染色结果显示：6月龄SHHF大鼠心肌细胞中细胞膜上，尤其是闰盘上观察到强的绿色荧光，8月龄SHHF大鼠心肌细胞闰盘上的绿色荧光增强，但在8月龄SHHF美托洛尔药物组大鼠心肌组织细胞闰盘上的绿色荧光有减弱。相关性分析发现左心室重量与左心室心肌组织膜蛋白匀浆中GRK2的水平呈正相关性(r=0.89：P＜0.001)。
结论:
SHHF大鼠在6月龄时，心肌纤维横向性生长达到高峰，同时开始心肌纤维的纵向性生长。免疫荧光染色和Werstern Blot结果显示6月龄时，在SHHF大鼠左心室肥大心肌细胞中表达无变化，但已经出现了在闰盘的聚积：8月龄时，GRK2表达增加并且向闰盘聚积进一步增强，而在美托洛尔药物组的SHHF大鼠左心室肥大心肌细胞GRK2表达减少并且无明显向闰盘聚积。提示GRK2参与高血压所致的心肌重建，美托洛尔影响心肌细胞GRK2是其抑制心肌肥大机制之一。
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