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经皮免疫通过在皮肤表面外敷抗原和佐剂而诱导机体免疫，是一种极具应用前景的新型免疫方法。本课题组之前的研究表明，基于醇质体（Ethosome,Eth）和蚕丝素（SF）构建的复合纳米纤维经皮肿瘤免疫膜能有效的引发机体免疫应答。为了改善纳米纤维的力学性能并提升载药量，本研究在上述体系中引入聚乙烯醇(PVA)和静电喷雾微球技术，并以甘露糖化聚乙烯亚胺（PEIman）对醇质体进行修饰，构建可靶向树突状细胞(DCs)的经皮肿瘤免疫膜。在此基础上，以黑色素瘤为模型（以黑色素瘤特异性的酪氨酸酶相关蛋白2（TRP2）为抗原，包裹于Eth内；未经甲基化的CpG基序（CpG ODN）为佐剂，负载于PEIman）上对该经皮肿瘤免疫膜进行评价研究，主要内容和结果如下：
（1）Eth-PEIman载体复合物的制备和表征。Eth-PEIman粒径（84.13±4.29nm）小，表面带正电荷，包封率高（86.1%±1.3）；Eth-PEIman与质粒DNA的最适N/P比值为15，可保护DNA不受DNaseI的酶解；Eth-PEIman浓度小于15μg/mL是具有良好的细胞相容性。
（2）Eth-PEIman对DCs的靶向诱导实验。DCs对Eth-PEIman表现出明显的吞噬行为，具有靶向转染DCs的能力；负载TRP2和CpG-ODN的载体复合物（TRP2@Eth-CpG@PEIman）可诱导DCs成熟分化。
（3）经皮肿瘤免疫膜的制备及其透皮性能评价。采用绿色电纺技术制备SF/PVA复合纳米纤维膜，其最适SF浓度为6%，PVA浓度为8%，共混比例为SF∶PVA=2∶5，所得复合纳米纤维直径（330.48±77.38nm）分布均匀，力学性能较SF纤维有显著提升，细胞相容性良好；静电喷雾技术将包裹Eth-PEIman的PVP微球（PVP{Eth-PEIman}）喷覆于SF/PVA纳米纤维膜上即得到经皮给药膜，体外实验表明该经皮给药膜具有良好的透皮性能。
（4）经皮肿瘤免疫性能研究。PVP{TRP2@Eth-CpG@PEIman}-SF/PVA经皮肿瘤免疫膜可显著提升小鼠血清分泌免疫相关炎性因子（IL-12和TNF-α）、促进CD4+和CD8+细胞毒T细胞在肿瘤灶内浸润、诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制黑色素瘤的生长；经皮免疫联合抗PD-1（aPD-1）治疗可产生协同抗肿瘤作用，显著增强细CD4+和CD8+T细胞活性，从而诱导肿瘤细胞大面积凋亡。
综上所述，本研究构建的经皮肿瘤免疫膜可有效诱导针对肿瘤抗原的特异性免疫从而抑制肿瘤生长。经皮免疫与aPD-1联合应用具有协同作用，可显著提升抗肿瘤疗效，是一种极具应用潜力的肿瘤治疗方案。
（1）Eth-PEIman载体复合物的制备和表征。Eth-PEIman粒径（84.13±4.29nm）小，表面带正电荷，包封率高（86.1%±1.3）；Eth-PEIman与质粒DNA的最适N/P比值为15，可保护DNA不受DNaseI的酶解；Eth-PEIman浓度小于15μg/mL是具有良好的细胞相容性。
（2）Eth-PEIman对DCs的靶向诱导实验。DCs对Eth-PEIman表现出明显的吞噬行为，具有靶向转染DCs的能力；负载TRP2和CpG-ODN的载体复合物（TRP2@Eth-CpG@PEIman）可诱导DCs成熟分化。
（3）经皮肿瘤免疫膜的制备及其透皮性能评价。采用绿色电纺技术制备SF/PVA复合纳米纤维膜，其最适SF浓度为6%，PVA浓度为8%，共混比例为SF∶PVA=2∶5，所得复合纳米纤维直径（330.48±77.38nm）分布均匀，力学性能较SF纤维有显著提升，细胞相容性良好；静电喷雾技术将包裹Eth-PEIman的PVP微球（PVP{Eth-PEIman}）喷覆于SF/PVA纳米纤维膜上即得到经皮给药膜，体外实验表明该经皮给药膜具有良好的透皮性能。
（4）经皮肿瘤免疫性能研究。PVP{TRP2@Eth-CpG@PEIman}-SF/PVA经皮肿瘤免疫膜可显著提升小鼠血清分泌免疫相关炎性因子（IL-12和TNF-α）、促进CD4+和CD8+细胞毒T细胞在肿瘤灶内浸润、诱导肿瘤细胞凋亡从而抑制黑色素瘤的生长；经皮免疫联合抗PD-1（aPD-1）治疗可产生协同抗肿瘤作用，显著增强细CD4+和CD8+T细胞活性，从而诱导肿瘤细胞大面积凋亡。
综上所述，本研究构建的经皮肿瘤免疫膜可有效诱导针对肿瘤抗原的特异性免疫从而抑制肿瘤生长。经皮免疫与aPD-1联合应用具有协同作用，可显著提升抗肿瘤疗效，是一种极具应用潜力的肿瘤治疗方案。