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目的：
本研究着重探讨miR-34a在人眼葡萄膜黑色素瘤细胞中的表达、功能以及分子机制研究，为葡萄膜黑色素瘤的诊断和治疗提供新的思路与理论基础。
方法：
体外培养人葡萄膜黑色素瘤细胞株M23和SP6．5。(1)Northern blotting检测人正常葡萄膜黑色素细胞D78和黑色素瘤细胞M23、SP6．5，以及黑色素瘤组织样本中miR-34a的表达情况；(2)采用阳离子脂质体Lipofectamine介导的基因转染技术将miR-34a转染入黑色素瘤细胞M23和SP6．5，并使其在细胞中表达；(3)用CY3荧光标记的随机序列小RNA分子进行转染效率检测；(4)应用MTS法检测转染miR-34a后对黑色素瘤细胞增殖的影响；(5)平板克隆形成实验观察转染miR-34a后黑色素瘤细胞克隆形成能力的改变；(6)流式细胞仪技术检测转染miR-34a后黑色素瘤细胞周期改变；(7)Transwell实验检测转染miR-34a后黑色素瘤细胞迁移能力的变化；(8)通过生物信息学预测miR-34a作用的靶基因，并用双荧光素酶报告基因检测进行验证；(9)用免疫荧光和Western blotting检测靶基因的表达以及其它细胞重要信号传导通路中蛋白的表达情况。
结果：
(1)Northern blotting结果显示：miR-34a在人眼葡萄膜黑色素细胞D78中高表达，而在人葡萄膜黑色素瘤组织样本和体外培养的黑色素瘤细胞株M23、SP6．5中表达明显下降；
(2)经基因转染技术将miR-34a转染入黑色素瘤细胞株M23、SP6．5，可以恢复miR-34a在黑色素瘤细胞中的表达；
(3)小分子RNA在M23和SP6．5细胞株中的转染效率接近100％；
(4)转染miR-34a后，人葡萄膜黑色素瘤细胞株M23、SP6．5的增殖明显受到抑制(P<0．01)；
(5)miR-34a能降低黑色素瘤细胞株M23、SP6．5的克隆形成能力；
(6)转染miR-34a后，黑色素瘤细胞M23、SP6．5停滞于G1期；
(7)miR-34a明显抑制黑色素瘤细胞株M23、SP6．5的迁移(P<0．01)；
(8)生物信息学方法预测c-Met是miR-34a作用的靶基因，通过将pRL-SV40、pMIR-Met3’UTR重组子和miR-34a共转染入HEK293细胞后，双荧光素酶报告基因检测荧光素酶表达下降，证实c-Met确为miR-34a的靶基因；
(9)免疫荧光和Western blotting检测均显示：转染miR-34a后，黑色素瘤细胞株M23、SP6．5的c-Met蛋白的表达均明显下降；
(10)Western blotting的结果显示：c-Met下游信号转导通路蛋白p-Akt以及其它细胞周期相关蛋白p-Rb、p-cdc2、E2F3的表达均下降。
结论：
miR-34a在人眼葡萄膜黑色素细胞中高表达，而在葡萄膜黑色素瘤组织样本和细胞株中表达均明显下降，将miR-34a转染入葡萄膜黑色素瘤细胞中，则可恢复miR-34a在细胞内的表达。miR-34a能抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移。c-Met是miR-34a作用的靶基因，并且miR-34a通过下调c-Met蛋白的表达水平，影响其下游的Akt信号传导通路，从而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖和迁移；同时miR-34a通过下调细胞周期相关蛋白Rb、cdc2和E2F3，抑制葡萄膜黑色素瘤细胞的增殖。