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脉络膜新生血管(Choroidal Neovascularization,CNV)是导致年龄相关性黄斑变性(AMD)患者失明的主要原因，而AMD是发达国家65岁以上人群不可逆性致盲的首要原因。随着我国人口老龄化趋势的加快以及人均寿命的延长，AMD已经成为我国老年人中主要致盲疾病之一。目前对AMD的发病机制尚不明确，治疗手段有限。随着分子生物学研究水平的提高和对免疫炎症认识的深入，有学者提出炎症在CNV的形成过程中扮演着重要角色。鉴于炎症在CNV的形成与发展过程中发挥的重要作用，我们将具有我国自主知识产权的抗炎新药99Tc-MDP(商品名：云克)应用于激光诱导的CNV小鼠动物模型，了解99Tc-MDP对CNV的形成具有抑制作用的机制，对促进血管生成的一系列细胞因子如细胞间粘附分子、基质金属蛋白酶进行定量研究。
第一部分99Tc-MDP对激光诱导的C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中ICAM-1表达的影响
目的：观察不同剂量的99Tc-MDP对小鼠脉络膜新生血管中的重要因子ICAM-1蛋白进行定量检测。
方法：将鼠龄为6-8周大的48只C57BL/6J小鼠按照随机化原则分成4组，分别为生理盐水对照组(n=12)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)和高剂量组(n=12)。使用倍频Nd∶YAG激光光凝建立C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管模型，激光光凝后每天分别予以腹腔注射0.5×10-1μg/kg(低剂量组)、1×10-1μg/kg(中剂量组)、2×10-1μg/kg(高剂量组)和等体积的生理盐水(生理盐水对照组)。注药三天后摘取眼球，ELISA法检测各实验组RPE-脉络膜组织ICAM-1蛋白的表达情况。
结果：注药三天后摘除眼球行ELISA法检测RPE-脉络膜组织中的ICAM-1含量，生理盐水对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组的RPE-脉络膜组织中ICAM-1含量见表1-3所示。低剂量组(0.5×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能够减少13.79％的ICAM-1表达(p＜0.05)；中剂量组(1×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能减少ICAM-132.96％的表达(p＜0.05)；高剂量组(2×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能减少ICAM-136.43％的表达(p＜0.05)。
结论：通过腹腔注射99Tc-MDP能够抑制ICAM-1蛋白的表达并抑制CNV的形成。
第二部分99Tc-MDP对激光诱导的C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中MMP-9和MMP-2变化的影响
目的：观察不同剂量的99Tc-MDP抑制C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。
方法：将鼠龄为6-8周大的48只C57BL/6J小鼠随机分为四组，低剂量组、中剂量组、高剂量组和生理盐水对照组，每天予以腹腔注射99Tc-MDP0.5×10-1μg/kg、1×10-1μg/kg、2×10-1μg/kg和等体积的生理盐水，于注药后第三天小鼠，取小鼠眼球用明胶酶谱法检测各实验组RPE-脉络膜组织MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。
结果：激光光凝注药三天后摘除眼球行明胶酶谱法检测RPE-脉络膜组织中的MMP-9和MMP-2含量可知：生理盐水对照组与低剂量组、生理盐水对照组与中剂量组、生理盐水对照组与高剂量组的RPE-脉络膜组织中proMMP-2和MMP-2含量差异有统计学意义(p＜0.05)，低剂量组与中剂量组、低剂量组与高剂量组、中剂量组与高剂量组的RPE-脉络膜组织中proMMP-2和MMP-2含量差异无统计学意义(p＞0.05)，各个实验组中RPE-脉络膜组织中MMP-9的含量差异没有统计学意义(p＞0.05)。
结论：经明胶酶谱法检测RPE-脉络膜组织中的MMP-2、MMP-9蛋白量表明0.5×10-1μg/kg/day1×10-1μg/kg/day和2×10-1μg/kg/day三个剂量的99Tc-MDP都能够显著抑制MMP-2及其酶原的表达从而抑制CNV的形成。99-Tc-MDP对MMP-9的抑制作用不明显。
第一部分99Tc-MDP对激光诱导的C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中ICAM-1表达的影响
目的：观察不同剂量的99Tc-MDP对小鼠脉络膜新生血管中的重要因子ICAM-1蛋白进行定量检测。
方法：将鼠龄为6-8周大的48只C57BL/6J小鼠按照随机化原则分成4组，分别为生理盐水对照组(n=12)、低剂量组(n=12)、中剂量组(n=12)和高剂量组(n=12)。使用倍频Nd∶YAG激光光凝建立C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管模型，激光光凝后每天分别予以腹腔注射0.5×10-1μg/kg(低剂量组)、1×10-1μg/kg(中剂量组)、2×10-1μg/kg(高剂量组)和等体积的生理盐水(生理盐水对照组)。注药三天后摘取眼球，ELISA法检测各实验组RPE-脉络膜组织ICAM-1蛋白的表达情况。
结果：注药三天后摘除眼球行ELISA法检测RPE-脉络膜组织中的ICAM-1含量，生理盐水对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组的RPE-脉络膜组织中ICAM-1含量见表1-3所示。低剂量组(0.5×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能够减少13.79％的ICAM-1表达(p＜0.05)；中剂量组(1×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能减少ICAM-132.96％的表达(p＜0.05)；高剂量组(2×10-1μg/kg/day)与生理盐水对照组相比能减少ICAM-136.43％的表达(p＜0.05)。
结论：通过腹腔注射99Tc-MDP能够抑制ICAM-1蛋白的表达并抑制CNV的形成。
第二部分99Tc-MDP对激光诱导的C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中MMP-9和MMP-2变化的影响
目的：观察不同剂量的99Tc-MDP抑制C57BL/6J小鼠脉络膜新生血管中MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。
方法：将鼠龄为6-8周大的48只C57BL/6J小鼠随机分为四组，低剂量组、中剂量组、高剂量组和生理盐水对照组，每天予以腹腔注射99Tc-MDP0.5×10-1μg/kg、1×10-1μg/kg、2×10-1μg/kg和等体积的生理盐水，于注药后第三天小鼠，取小鼠眼球用明胶酶谱法检测各实验组RPE-脉络膜组织MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。
结果：激光光凝注药三天后摘除眼球行明胶酶谱法检测RPE-脉络膜组织中的MMP-9和MMP-2含量可知：生理盐水对照组与低剂量组、生理盐水对照组与中剂量组、生理盐水对照组与高剂量组的RPE-脉络膜组织中proMMP-2和MMP-2含量差异有统计学意义(p＜0.05)，低剂量组与中剂量组、低剂量组与高剂量组、中剂量组与高剂量组的RPE-脉络膜组织中proMMP-2和MMP-2含量差异无统计学意义(p＞0.05)，各个实验组中RPE-脉络膜组织中MMP-9的含量差异没有统计学意义(p＞0.05)。
结论：经明胶酶谱法检测RPE-脉络膜组织中的MMP-2、MMP-9蛋白量表明0.5×10-1μg/kg/day1×10-1μg/kg/day和2×10-1μg/kg/day三个剂量的99Tc-MDP都能够显著抑制MMP-2及其酶原的表达从而抑制CNV的形成。99-Tc-MDP对MMP-9的抑制作用不明显。