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目的 构建人单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus，HSV-1)绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)真核表达系统，用于HSV感染的快速诊断。 方法 提取HSV-1 DNA，利用DNA Star软件设计对应于HSV-1 SM44株ICP6启动子的PCR引物，引入BamHI和HindⅢ酶切位点。PCR扩增目的基因片段，将回收纯化的PCR产物连接至pMD18-T载体构建亚克隆，切下目的基因，连接至真核表达载体pEGFP-1构建重组质粒pICP6-EGFP，经双酶切和DNA测序鉴定后，以阳离子脂质体法(Lipofectamine2000)转染Vero细胞。转染48h后，加入G418(400μg／ml)筛选阳性细胞克隆，进行放大培养建立稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞。以不同量的HSV-1感染Vero-ICP6-EGFP细胞，分别于感染后6h、8h、10h，以倒置荧光显微镜检测GFP荧光；于感染后15h以流式细胞术测定GFP荧光的量和强度；同时以人巨细胞病毒和柯萨奇病毒检测Vero-ICP6-EGFP细胞诱导表达的特异性。 结果 经PCR扩增获得441bp大小的目的基因片段，构建的重组质粒pICP6-EGFP经双酶切及DNA测序鉴定，表明重组正确。重组质粒pICP6-EGFP转染Vero细胞后，以G418筛选11天出现阳性细胞克隆，建立的稳定转染细胞株Vero-ICP6-EGFP细胞经HSV-1诱导感染，最早于6h即可在倒置荧光显微镜下检测到GFP绿色荧光，随着时间的增加，GFP荧光的量及强度逐渐增加。流式细胞术检测结果表明，GFP荧光的量及强度随HSV-1病毒的滴度增加而增加。人巨细胞病毒和柯萨奇病毒感染Vero-ICP6-EGFP细胞后6h、10h及24h，均未检测到特异性荧光出现。 结论 本研究建立的人单纯疱疹病毒1型—绿色荧光蛋白真核表达系统，具有早期、快速、灵敏等优点，特异性较高，进一步完善后有望用于HSV-1感染的诊断，以及抗病毒药物的筛选。