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目的探讨艾塞那肽-4（Exendin-4, Ex4）对小鼠异种胰岛细胞移植的存活时间影响及其作用规律。结合糖尿病小鼠肾被膜下异种胰岛细胞移植模型，通过给予Ex4干预，实现异种胰岛细胞长期存活的途径。方法选取55只SD大鼠，分为2组，分别用于确定胶原酶P最佳消化时间和提取胰岛细胞。为确定胶原酶最佳消化时间，在胰腺消化过程中，每隔10分钟取一定量细胞悬液进行双硫腙（Diphenylthiocarbazne, DTZ）染色并计数胰岛细胞的数量，细胞数量最多的时间点即为胶原酶P消化胰腺的最佳时间点。采用Ficoll-PaqueTMPLUS溶液对胰岛细胞进行分离纯化，结合DTZ染色鉴别胰岛细胞及AO-PI荧光染色分析胰岛细胞活性。选取70只血糖正常的小鼠用于糖尿病小鼠模型的制作。建模前先禁食12小时，按照200mg/kg给予腹腔一次性注射链脲佐菌素（Streptozotocin, STZ），分别测定小鼠给药前及给药后1周内每天空腹血糖。维持5天以上空腹血糖值>11.1mmol/L或随机血糖值>16.7mmol/L并伴有多饮、多食、多尿等症状作为判断糖尿病小鼠模型成功的标准。在建成糖尿病模型的小鼠左肾被膜下移植相同数量的胰岛细胞，将其随机分成3组（对照组、Ex4低剂量注射组和Ex4高剂量注射组），低剂量组皮下注射Ex4的浓度为0.1μg/(kg*d)，高剂量组皮下注射Ex4的浓度为0.4μg/(kg*d)，对照组注射磷酸盐缓冲液，检测并记录各组小鼠血糖值每天的变化情况。实验结束后取血清测定胰岛素含量、小鼠各脏器做病理切片行HE染色及免疫组化，Western-blot实验验证目标蛋白胰岛素α链含量。结果①浓度为1mg/ml的胶原酶P消化胰腺的最佳时间段为30分钟。②70只小鼠中有51只小鼠成模，成模率为72.86%。③对照组第1天出现小鼠随机血糖<16.7mmol/L，最长的维持5天后随机血糖>16.7mmol/L；低剂量Ex4注射组第1天出现小鼠随机血糖<16.7mmol/L，最长的维持至12天；高剂量Ex4注射第2天出现小鼠随机血糖<16.7mmol/L，最长的维持至第9天。对三组小鼠血糖值进行统计学分析，结果发现：第7、8和12天实验组小鼠血糖值比对照组低，差别有统计学意义（P<0.05），但是低剂量组和高剂量组之间差别无统计学意义（P>0.05）。④免疫组化结果提示Ex4低剂量注射组和Ex4高剂量注射组胰岛细胞存活数量均比对照组多；Western-Blot结果提示低剂量Ex4注射组和高剂量Ex4注射组有目标蛋白表达，对照组无目标蛋白表达。⑤血清胰岛素检测结果提示低剂量和高剂量Ex4注射组血清胰岛素明显高于对照组。结论通过以上实验结果表明： Ex4能抑制异种胰岛细胞移植后的凋亡，延长其存活时间，增加胰岛素的分泌；采用Ficoll-PaqueTMPLUS溶液纯化提取胰岛细胞，操作简便，分离纯度较好；STZ可用于建立小鼠糖尿病模型，成模率高；肾被膜作为胰岛细胞异种移植的部位，效果较好，具有可行性。