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[目的]本研究以结肠炎癌转化过程中的关键节点——结肠畸变隐窝灶ACF(Aberrant crypt focus,ACF)的形成为切入点,以AOM/DSS诱导构建结肠炎癌转化小鼠模型为研究对象。明确痛泻要方对结肠炎-癌演进全病程的干预效应,以及对结肠畸变隐窝灶的影响。监测痛泻要方对小鼠血清中和结肠组织中炎症相关因子IL-6、NF-κB、STAT3的表达情况,以及Wnt/β-catenin信号通路的影响,从干预结肠隐窝畸变的角度深入探讨痛泻要方干预结肠炎癌转化的效应机制。[方法]1.结肠炎癌转化模型的建立及ACF形成的结局评价:C57BL/6小鼠予第1天AOM(12mg/kg)腹腔注射,DSS 3%(W/V)、无菌水循环饮用7周(第1周予无菌水饮用;第2周予DSS饮用;第3、4周予无菌水饮用;再予DSS饮用5天;最后予无菌水饮用16天,完成为期7周的DSS、无菌水循环饮用)。分别于第4、5、6、7周末取材。监测小鼠一般状态、体重、疾病活动指数评分(DAI)、结肠长度、成瘤情况等,HE染色观察结肠组织病理形态学改变以及ACF形成情况及数量。通过各时间节点的病理组织形态以及ACF的形成情况及数量评价模型的有效性。2.痛泻要方对结肠炎-癌演进全程及ACF的干预效应:将C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、阳性组、痛泻要方高中低剂量组,每组40只。除空白组外其余各组予AOM/DSS诱导构建结肠炎癌转化动物模型。注射AOM观察1周后各组开始给予相应药物干预,连续给药6周。分别于第4、5、6、7周末取材。监测小鼠一般状态、体重、DAI评分、结肠长度、成瘤情况等,通过观察各时间节点的结肠组织病理形态学改变、ACF计数等情况,评价药物疗效,并筛选痛泻要方最优剂量。3.痛泻要方干预结肠隐窝畸变的效应机制:取小鼠血清、结肠组织,ELISA法检测血清中炎症因子IL-6的表达情况,免疫组织化学染色法检测结肠组织局部炎症介质NF-κB、STAT3表达情况,Western blot检测结肠组织Wnt、β-catenin的表达。[结果]1.成功模拟结肠炎癌转化病变全程建立稳定的动物模型。病理组织切片观察显示,模型组4周末组织标本:结肠上皮、固有层广泛炎症细胞浸润,隐窝炎症形成。部分标本切片可见肠粘膜脱落。炎症越靠近肛门越严重;模型组第5周末组织标本:可见隐窝结构紊乱,腺体变形,排列紊乱,部分可见畸变隐窝灶;模型组第6周末组织标本:大部分小鼠结肠可见不典型增生,细胞核大深染,核质比例较大,细胞排列紊乱,极向消失;模型组第7周末组织标本:全部小鼠出现癌变,形成结肠肿瘤。2.痛泻要方确能干预结肠炎癌转化模型小鼠,并能减少ACF的形成。小鼠一般情况、体重、DAI评分、结肠长度、成瘤情况:阳性组与痛泻要方高、中剂量组小鼠一般情况、精神状态、活动度较好,大便逐渐成形,偶可见便血,体重下降幅度小,成瘤率较其余组低,结肠缩短幅度较小。除空白组外,其余各组DAI评分均有增高,阳性组与痛泻要方高、中剂量组DAI评分升高幅度较其余各组小。组织病理切片观察:各用药组,第4、5、6、7周末,均未见腺癌形成。痛泻要方在第5周末对畸变隐窝灶ACF形成的影响:与模型组相比,阳性组、痛泻要方中剂量组ACF形成明显较少,差异显著(P<0.01)。3.痛泻要方对模型小鼠血清中IL-6、结肠组织中NF-κB、STAT3、Wnt/β-catenin的影响:①小鼠血清中IL-6含量:与空白组比较,模型组小鼠血清IL-6升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,阳性组IL-6含量降低,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,痛泻要方中剂量组IL-6含量降低,差异有统计学意义(P<0.05)。表明痛泻要方能够下调小鼠血清IL-6。②小鼠结肠组织中NF-κB、STAT3的表达情况:与空白组小鼠比较,模型组小鼠结肠组织NF-κB、STAT3的表达上调。与模型组小鼠比较,阳性药物组、痛泻要方中剂量组小鼠结肠组织NF-κB、STAT3的表达均呈显著下调。与阳性药物组比较,痛泻要方中剂量组小鼠结肠组织NF-κB、STAT3的表达高于阳性药物组。③小鼠结肠组织Wnt/β-catenin表达情况:与空白组比较,模型组、阳性组、痛泻要方中剂量组小鼠结肠组织中Wnt、β-catenin蛋白表达明显增多,差异极显著(P<0.01);与模型组相比,阳性组、痛泻要方中剂量组小鼠结肠组织中Wnt、β-catenin蛋白表达明显减少,差异极显著(P<0.01)。[结论]痛泻要方能减少ACF的形成,延缓结肠炎癌演进。其干预结肠隐窝畸变可能与其降低结肠炎癌转化模型小鼠血清及结肠组织中的炎症因子IL-6、核转录因子NF-κB、STAT3,从而调控Wnt/β-catenin信号通路有关。