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以红笛鲷弧菌病的主要病原菌——溶藻弧菌为抗原,制备兔抗血清;利用辣根过氧化酶标记的羊抗兔血清为酶标二抗,建立了酶联免疫吸附试验检测技术。确定了间接双抗体夹心法的最佳优化条件是:兔抗溶藻弧菌血清的稀释度为1:16000,辣根过氧化酶标记山羊抗兔IgG的稀释度为1:2000;包被液为0.05mol/L,pH9.6碳酸缓冲液,包被条件为37℃1h后4℃过夜,洗涤缓冲液为0.01mol/L pH7.4的PBST,封闭液为5%BSA-PBS,0.01mol/L pH7.4的PBS作为稀释液,底物的最佳反应时间为15min。应用本实验建立的间接双抗体夹心法对红笛鲷进行现场检测,患病红笛鲷特异性抗体的检出率为70%,外观健康红笛鲷的检出率为20%。结果表明,本实验所建立的ELISA检测法可以用于红笛鲷弧菌病的血清流行病学研究,而且可以检测出隐性感染状态下的红笛鲷。
用本实验建立的间接双抗体夹心法对湛江港养殖海域红笛鲷弧菌病进行较大规模的血清流行病学调查,目的在于摸清红笛鲷弧菌病在该地区的流行现状以配合对该病进行药物控制。并且用ELISA做红笛鲷弧菌病血清抗体水平动态的评定,以便为今后开展血清流行病学调查提供依据。研究结果显示,2006年湛江港养殖海域红笛鲷弧菌病高发期是10月,11月和12月,感染率分别是61.67%,53.33%和30.00%,表明红笛鲷弧菌病流行仍相当严重。红笛鲷血清内抗溶藻弧菌抗体水平在8-12月份最高。
为深入研究鱼类的免疫机制,本文在对红笛鲷弧菌病进行血清流行病学调查的同时,也对红笛鲷的非特异性免疫功能进行了周年调查,分别测定了血清抗菌活力、血清溶菌活力以及溶菌酶相对含量,通过上述指标的变化趋势来探讨病害发生对鱼类非特异性免疫功能的影响。实验结果显示,红笛鲷非特异性免疫水平与弧菌病的发生没有明显的相关性,但与弧菌数量的变化规律有一定的正相关性。