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暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)隶属硬骨鱼纲,辐鳍亚纲,鲀形目,鲀科,东方鲀属,又名河鲀,俗称河豚,是我国引进的淡水养殖新品种,具有较高营养和经济价值。氨基酸是鱼饲料中重要的营养因子,本论文通过2个生长实验和1个基因表达的实验研究了饲料赖氨酸和蛋氨酸添加量,探讨饲料不同氨基酸水平对暗纹东方鲀生长、饲料利用、血液指标、酶活和肌肉氨基酸合成的影响。 在生长实验中,以鱼粉、豆粕和花生粕等为饲料主要蛋白源,分别添加不同浓度梯度的包膜赖氨酸和包膜蛋氨酸,使饲料中赖氨酸和蛋氨酸浓度分别为(1.80%、2.08%、2.36%、2.64%、2.86%、3.05%)和(0.66%、0.82%、0.91%、1.04%、1.14%、1.29%),配制各6组等氮等能的饲料。暗纹东方鲀被随机分为6组,每组3个平行,饲养两个月,综合各项指标确定暗纹东方鲀赖氨酸和蛋氨酸需求量。 通过提取摄食6组不同蛋氨酸水平饲料的鱼体肝脏RNA、合成样品cDNA、设计引物、采用实时荧光定量PCR技术,研究饲料不同蛋氨酸水平对暗纹东方鲀肝脏金属硫蛋白(MT)、热激蛋白(Hsp90)、过氧化氢酶(CAT)和铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)基因表达的影响。 实验主要结果如下: 1.饲料适宜赖氨酸和蛋氨酸水平分别为2.19%和1.03%(占饲料干重)或(4.79%和2.40%占饲料蛋白)。饲料中适宜赖氨酸水平能显著提高暗纹东方鲀增重率(WG)(P<0.05)。适宜蛋氨酸水平能显著提高暗纹东方鲀幼鱼WG、特定生长率(S GR)、蛋白质效率(PER),降低饲料系数(FCR)(P<0.05)。 2.饲料不同赖氨酸和蛋氨酸水平对暗纹东方鲀全鱼和肌肉粗蛋白、粗脂肪、粗灰分和水分无显著性影响(P>0.05)。在赖氨酸和蛋氨酸水平分别为2.08%和0.82%时鱼体脏体比(HSI)、肝体比(VSI)均达到最大值,在赖氨酸和蛋氨酸水平分别为2.86%和1.14%时鱼体肥满度(CF)达到最小值(P<0.05)。 3.饲料赖氨酸水平显著影响了暗纹东方鲀肌肉缬氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、赖氨酸、组氨酸和精氨酸含量(P<0.05)。饲料蛋氨酸水平显著影响了暗纹东方鲀肌肉蛋氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸及总氨基酸量(P<0.05)。 4.饲料不同赖氨酸和蛋氨酸水平显著影响了暗纹东方鲀血液白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、活性氧(ROS)、血细胞总数(THC)(P<0.05)。AST、ALT随着蛋氨酸水平升高而降低。THC随着蛋氨酸水平的升高而升高。ROS随着蛋氨酸水平的升高先降低后升高。 5.饲料赖氨酸水平对暗纹东方鲀肝脏AST活性有显著影响(P<0.05),对ALT、淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)及肉毒碱乙酰转移酶(CRAT)无显著性影响(P>0.05)。饲料蛋氨酸水平对暗纹东方鲀肝脏胰蛋白酶(TRY)、AMY无显著性影响(P>0.05),LPS随着蛋氨酸水平升高先升高后下降。 6.饲料中蛋氨酸水平在1.14%时,暗纹东方鲀肝脏中MT表达量显著高于对照组(P<0.05)。Hsp90的表达量在0.91%组达到最大值,但蛋氨酸水平超出1.04%时,Hsp90基因表达量显著低于对照组(P<0.05)。饲料蛋氨酸水平对CAT和Cu/Zn SOD mRNA相对表达量无显著性影响(P>0.05),但表达量分别在1.04%组和1.14%组达到最大值。 以上研究表明,暗纹东方鲀可以较好吸收利用饲料包膜赖氨酸和包膜蛋氨酸,因此对赖氨酸和蛋氨酸需求量分别为2.19%和1.03%(占饲料干重)或4.79%和2.40%(占饲料蛋白)。饲料赖氨酸和蛋氨酸水平显著影响了暗纹东方鲀血液指标、鱼体形态学指标、组织酶活、肌肉氨基酸合成(P<0.05)。对鱼体营养成分无显著性影响(P>0.05)。饲料中适宜蛋氨酸水平会显著影响Hsp90,MT mRNA表达量(P<0.05),对CAT和Cu/Zn SOD mRNA表达量无显著性影响(P>0.05)。