论文部分内容阅读
目的:通过观察启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物对食管癌EC9706细胞增殖、细胞周期、细胞内游离钙离子、钙调蛋白、钙调神经磷酸酶、PI3K蛋白表达的影响,揭示以上四方诱导EC9706细胞周期阻滞的信号传导机制与差异。探讨食管癌中医证候病机“郁、痰、瘀、虚”的分子生物学内涵。
方法：体外培养食管癌EC9706细胞,用启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物处理细胞,MTT法检测四证方对食管癌EC9706细胞增殖影响的量效关系;倒置显微镜下观察食管癌EC9706细胞形态学变化;PI单染标记流式细胞术检测启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物对食管癌EC9706细胞周期的影响;激光扫描共聚焦显微镜观察经启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物作用后的EC9706细胞中Ca2+荧光强度的变化;Western blotting测定以上四方对食管癌EC9706细胞钙调蛋白、钙调神经磷酸酶、磷酸肌醇-3激酶、蛋白激酶Bα、NFκ Bp50蛋白表达的影响。
结果：1.启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物均可不同程度地抑制食管癌EC9706细胞的增殖,其抑制率呈剂量依赖关系;启膈散、通幽汤和沙参麦冬汤醇提物影响了细胞形态结构。2.启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物对EC9706细胞周期各时相均有影响。与对照组比较,各药物组G2/M期细胞比率升高。启膈散组、沙参麦冬汤组G2/M期细胞比率明显升高,P＜0.05。通幽汤组、补气运脾汤组细胞阻滞在G0/G1期。3.激光扫描共聚焦显微镜检测结果,启膈散组、通幽汤组、沙参麦冬汤组和补气运脾汤组升高了食管癌EC9706细胞内Ca2+荧光强度。与对照组相比,有显著性差异,P＜0.05。启膈散组最强,通幽汤组次之,沙参麦冬汤组再次之,补气运脾汤组较弱。4.启膈散组、通幽汤组、沙参麦冬汤组和补气运脾汤组均可不同程度下调CaM、CaN蛋白表达水平。5.启膈散组、通幽汤组和沙参麦冬汤组明显抑制PI3K、蛋白激酶Bα、NFκBp50蛋白的表达。其中,启膈散组最强,通幽汤组次之,沙参麦冬汤组再次之,补气运脾汤作用较弱。
结论：启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物均可不同程度地抑制食管癌EC9706细胞的增殖,影响食管癌EC9706细胞形态改变,其抑制率呈剂量-效应关系。启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物抑制EC9706细胞增殖作用机制与食管癌EC9706细胞周期阻滞于G0/G1期或G2/M期,食管癌EC9706细胞内Ca2+浓度升高,与钙调蛋白、钙调神经磷酸酶下调和PI3K蛋白、蛋白激酶Bα、NFκBp50蛋白表达抑制有关。食管癌中医证候病机中的“郁、痰、瘀、虚”与Ca2+/CaM/CaN和PI3K信号转导通路增强相关。本研究通过启膈散、通幽汤、沙参麦冬汤和补气运脾汤醇提物对食管癌EC9706细胞作用的研究,为中医治疗食管癌提供了初步的实验基础。