苜蓿皂苷提取工艺及其减肥作用研究

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苜蓿为多年生草本豆科苜蓿属植物,是世界上栽培历史悠久、种植面积较大的牧草,它以产量高、营养丰富、适口性好而享有“牧草之王”的美誉。目前,苜蓿叶蛋白(MLP)、苜蓿皂苷(MSS)、苜蓿多糖(MPS)等提取物的研究已成为苜蓿研究的热点。其中,MSS的生理活性及药理作用的研究引起了人们很大的兴趣。皂苷是广泛存在于自然界的一种天然物质,是由糖中羟基或非糖类化合物的羟基以缩醛(苷键)脱水缩合而成的环状缩醛衍生物。苜蓿的根、茎、叶中都含有一定量的皂苷,其化学成分结构复杂,由甾类化合物的寡糖苷及三萜类化合物的寡糖苷所构成。提取MSS一般采用有机溶剂萃取法和大孔吸附树脂法。大孔吸附树脂法是近年来用于天然产物分离的一种新方法,具有工艺简便、条件温和、可反复使用等优点,用于皂苷分离纯化的文献报道逐年增加。本实验采用大孔吸附树脂分离纯化苜蓿水提取液中的皂苷,确定该法从苜蓿中提取MSS的最佳工艺条件。 MSS具有多种药理活性和生物活性。如可抑制胆固醇在肠道中吸收,降低血清胆固醇,防治心脑血管疾病,还可以作为食品的天然甜昧剂、增味剂和抗氧化剂。Malinow报道MSS可有效地治疗实验性高胆固醇血症,并在几种动物实验中都证明具有疗效。丛学滋等人也对MSS的降低血清胆固醇及减轻实验性动脉粥样硬化作用进行了研究,证明MSS对改善心外膜下的较大冠状动脉的内膜阻塞程度有明显作用。而有关MSS减肥作用的研究未见报道,该实验将MSS经口给予实验性肥胖模型大鼠,观察MSS的减肥作用,以期进一步开发苜蓿的新用途。目的:确定大孔吸附树脂分离纯化MSS的工艺参数。 方法:以MSS的吸附量、解吸率为指标,分别对DM-301、HPD700、HPD600、HPD450、HPD300、HPD100、HZ-841、AB-8、D-101型大孔吸附树脂的吸附和解吸性能进行考察。选择吸附、解吸效果最佳树脂作为分离MSS所用大孔树脂。用该树脂吸附MSS,考察吸附时间、上样溶液浓度、溶液pH值、溶液温度对吸附量的影响;使用动态吸附-解吸法考察,以10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇和70%乙醇洗脱,测定洗脱液中MSS含量,计算洗脱率,确定洗脱溶媒的浓度和用量。 结果:通过静态吸附法确定了AB-8型大孔吸附树脂能有效分离纯化MSS。具体工艺参数为:通过静态吸附性能的考察,确定MSS最佳吸附上样浓度为0.1%,pH值为2.0,溶液温度为30℃,吸附时间为11小时;通过动态解吸性能的考察,表明60%的乙醇溶液5.0 BV可将MSS完全洗脱。 结论:AB-8型大孔吸附树脂能有效分离纯化富集MSS,60%的乙醇溶液5.0 BV可将MSS完全洗脱。 目的:研究MSS的减肥作用并探讨其可能的作用机制。 方法:将60只雄性SD大鼠随机分为6组(每组10只):①空白对照组;②肥胖模型对照组;③MSS高剂量组(2.0g/kg);④MSS中剂量组(1.0 g/kg);⑤MSS低剂量组(0.5g/kg);⑥阳性药(曲美)对照组(2.5mg/kg)。空白对照组给予正常饲料,其余各组给予高能营养饲料。同时MSS各组分别灌胃MSS高、中、低剂量;阳性对照组灌胃曲美悬浮液,空白对照组和模型对照组灌胃等容积的蒸馏水,灌胃体积10ml/kg体重。每周称重2次,连续给药70天,末次给药后断食12h,腹腔注射20%乌拉坦麻醉(6ml/kg),腹主动脉取血并取材。测定肾脏及生殖器周围脂肪重量,测量脂肪细胞最大长径、最大宽径及平均面积,测定肝脏总胆固醇含量,血液学指标观察全血血红蛋白含量(Hgb)、血清白蛋白含量(SAB)、血液葡萄糖含量(BGLu)。 结果 1.MSS对营养肥胖型大鼠体重的影响:MSS中剂量组从给药第16天,高剂量组从给药第30天开始大鼠体重明显减轻,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),并一直持续到给药70天停药时。MSS对肥胖大鼠体重的增长具有明显的抑制作用。 2.MSS对营养肥胖型大鼠体内脂肪和脂肪细胞的影响:MSS高、中剂量组与肥胖模型组比较,体脂含量明显减少(P<0.05,P<0.01);镜下观察脂肪细胞,MSS高、中剂量组与肥胖模型组相比,视野内脂肪细胞数目明显增多(P<0.01),细胞最大长径、最大宽径和平均面积均明显减小(P<0.01),MSS低剂量组脂肪细胞最大宽径、平均面积与模型对照组比较也明显减小(P<0.05);表明MSS具有较好的减肥效果。 3 MSS对营养肥胖型大鼠肝脏重量和肝脏总胆固醇含量的影响:与模型对照组比较,MSS高、中、低剂量组均能明显降低营养肥胖型大鼠肝脏重量(P<0.05)、肝脏重量系数(P<0.05,P<0.01)和肝脏总胆固醇含量(P<0.05,P<0.01)。 4 MSS对营养肥胖型大鼠Hgb、BGLu和SAB的影响:MSS对营养肥胖型大鼠Hgb、BGLu和SAB无明显影响,各组间比较均无显著性差异(P>0.05)。 结论:MSS可明显减轻营养肥胖型大鼠的体重,显著降低营养肥胖型大鼠体内脂肪含量,对脂肪细胞最大长径、最大宽径和平均面积均有不同程度的影响;MSS能明显降低营养肥胖型大鼠肝脏重量和肝脏总胆固醇含量;MSS具有较好的减肥作用。
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