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背景:20世纪70年代后期,环状RNA(CircRNA)被认为是一类的长链非编码RNA(lncRNA)。科学家们最初是通过电子显微镜在人细胞系中检测到CircRNAs,随后越来越多的环状RNA通过实验所发现。环状RNA转录产物在结直肠癌基因中被发现,产生的转录因子用于指导Netrin-1的表面受体,证明CircRNAs实际上起源于转录基因[1,2]。随后的几年中,在细胞中发现了不同亚型CircRNA剪切产生的几个基因,包括来自ETS-1,抗肌萎缩蛋白和细胞色素P-4502C18基因Cocquerelle等。最初,这些CircRNAs被认为是异常剪接的潜在“致病性产物”或“错误转录/拼接产物”并没有得到太多关注[3-5]。然而,随着新的科学技术发展和科研思维的改进,CircRNAs被人们质疑和排斥的心理逐渐得到了改变,其重要作用也在不断的被科学家们所发现。通过高通量测序核糖体RNA,发现人类成纤维细胞可以容纳25000个独特且稳定的CircRNAs。先前的研究表明,CircRNA实际上可占人类总RNA的约1%。大多数人认为环状RNA(CircRNA)对信使RNA或线性非编码(lnc)RNA的表达有影响,作为非编码长链RNA,其在细胞周期的调控,遗传,细胞分化中起到了重要的作用,参与生命体的多种生命活动,在整个遗传学中是一种极为重要的长链非编码RNA。CircRNAs是大量存在的,甚至超过了mRNA或lncRNA。CircRNAs大量存在于人脑中,并且在胎儿发育期间大量增加。近些年,环状RNA作为一种新的、自身特点明显的非编码RNA,越来越受到科学家们的重视,其在众多疾病中的特异性表达,尤其在各种肿瘤疾病中的表达,让环状RNA在未来有可能作为一种新的生物标记对肿瘤进行诊断[6]。研究表明环状RNA在多种疾病中起到关键作用,例如:卵巢癌、结直肠癌、特发性肺纤维化、乳腺癌、胃癌等,但环状RNA在很多癌症中的表达机制和作用尚不清楚[7-10]。作为SHPRH基因转录产物,环状RNAhsa_cir_0001649对机体的影响主要通过负向调控Wnt(wingless)/β-catenin信号通路来影响肿瘤的发生与发展[11,12]。
目的:探究环状RNAhas_circ_0001649在结肠癌组织中的表达,环状RNAhas_circ_0001649在术前病人外周血中的表达与术后病人外周血中的表达是否具有差异性;环状RNAhas_circ_0001649在肿瘤细胞中的表达与正常细胞的表达是否一致,是否具有差异性,其它因素如:TNM分期、性别、年龄等对环状RNA:has_circ_0001649表达的影响,其它因素是否能影响环状RNAhas_circ_000164的表达,明确环状RNAhas_circ_0001649在临床应用上是否具有一定价值,在未来结直肠癌的诊断和预后中能否作为潜在的生物标记。
方法:招募初发初诊的结直肠癌患者60人且来院前未经过任何治疗,在术中收集所招募的结肠癌患者的肿瘤组织和正常组织60对,立即放置于冻存管中并冻存于﹣80℃下,以备后续使用,为了减少误差,收集样本的人不参与此次试验的整个过程。Trizol法从组织中提取TotalRNA,用QIAGEN试剂盒提取结直肠癌患者术前与术后血液中的totalRNA和细胞中totalRNA,在10ul35℃的体系下,逆转录为cDNA,冻存于﹣80℃下,以备后续使用;使用设计好的引物,通过qRT-PCRs检测环状RNAhas_circ_0001649在结肠癌患者肿瘤血液、组织和细胞中的表达,样本在qRT-PCRs中的表达使用2-ΔΔCt来分析,将数据录入SPSS13.0软件和GraphPadPrism5.0软件(GraphPadsoftware,LaJolla,CA)进行数据分析和作图,hsacirc0001649在肿瘤细胞与正常细胞、肿瘤组织与其配对的正常组织、术前外周血与术后外周血中的表达,用配对T检验对数据进行分析;使用单因素方差分析(ANOVA)来分析hsa_cir_0001649的表达与临床病理因素之间的关系。
结果:环状RNA:hsa_circ_0001649在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(n=60,P<0.010),在术后病人的外周血中的表达明显升高(n=15,P<0.010),且在肿瘤细胞HCT116中的表达低于正常细胞(n=15,P<0.010),在肿瘤细胞LOVO中的表达也明显低于正常细胞(n=15,P<0.010),以hsa_circ_0001649在组织中的表达作为原始数据进行ROC曲线分析,其曲线下面积是0.857,其敏感度与特异度分别为0.781和0.828,随后收集并处理60名结直肠癌患者的其它基础资料,发现hsa_circ_0001649在结直肠癌中的表达与肿瘤的分化程度呈负相关(P=0.041),且与年龄、性别、TNM分期、CEA、CA19-9、AFP无明显关系。
结论:环状RNA:hsa_circ_0001649在结肠癌的肿瘤组织中的表达明显降低,低于正常组织。在术后病人血清中的表达明显高于术前病人,在肿瘤细胞中的表达低于正常细胞,其表达的高低与肿瘤的分化程度有密切相关的联系,呈负相关,与年龄、性别、TNM分期、CEA、CA19-9、AFP等因素无关,故在结肠癌的诊断中有潜在的应用价值。
目的:探究环状RNAhas_circ_0001649在结肠癌组织中的表达,环状RNAhas_circ_0001649在术前病人外周血中的表达与术后病人外周血中的表达是否具有差异性;环状RNAhas_circ_0001649在肿瘤细胞中的表达与正常细胞的表达是否一致,是否具有差异性,其它因素如:TNM分期、性别、年龄等对环状RNA:has_circ_0001649表达的影响,其它因素是否能影响环状RNAhas_circ_000164的表达,明确环状RNAhas_circ_0001649在临床应用上是否具有一定价值,在未来结直肠癌的诊断和预后中能否作为潜在的生物标记。
方法:招募初发初诊的结直肠癌患者60人且来院前未经过任何治疗,在术中收集所招募的结肠癌患者的肿瘤组织和正常组织60对,立即放置于冻存管中并冻存于﹣80℃下,以备后续使用,为了减少误差,收集样本的人不参与此次试验的整个过程。Trizol法从组织中提取TotalRNA,用QIAGEN试剂盒提取结直肠癌患者术前与术后血液中的totalRNA和细胞中totalRNA,在10ul35℃的体系下,逆转录为cDNA,冻存于﹣80℃下,以备后续使用;使用设计好的引物,通过qRT-PCRs检测环状RNAhas_circ_0001649在结肠癌患者肿瘤血液、组织和细胞中的表达,样本在qRT-PCRs中的表达使用2-ΔΔCt来分析,将数据录入SPSS13.0软件和GraphPadPrism5.0软件(GraphPadsoftware,LaJolla,CA)进行数据分析和作图,hsacirc0001649在肿瘤细胞与正常细胞、肿瘤组织与其配对的正常组织、术前外周血与术后外周血中的表达,用配对T检验对数据进行分析;使用单因素方差分析(ANOVA)来分析hsa_cir_0001649的表达与临床病理因素之间的关系。
结果:环状RNA:hsa_circ_0001649在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织(n=60,P<0.010),在术后病人的外周血中的表达明显升高(n=15,P<0.010),且在肿瘤细胞HCT116中的表达低于正常细胞(n=15,P<0.010),在肿瘤细胞LOVO中的表达也明显低于正常细胞(n=15,P<0.010),以hsa_circ_0001649在组织中的表达作为原始数据进行ROC曲线分析,其曲线下面积是0.857,其敏感度与特异度分别为0.781和0.828,随后收集并处理60名结直肠癌患者的其它基础资料,发现hsa_circ_0001649在结直肠癌中的表达与肿瘤的分化程度呈负相关(P=0.041),且与年龄、性别、TNM分期、CEA、CA19-9、AFP无明显关系。
结论:环状RNA:hsa_circ_0001649在结肠癌的肿瘤组织中的表达明显降低,低于正常组织。在术后病人血清中的表达明显高于术前病人,在肿瘤细胞中的表达低于正常细胞,其表达的高低与肿瘤的分化程度有密切相关的联系,呈负相关,与年龄、性别、TNM分期、CEA、CA19-9、AFP等因素无关,故在结肠癌的诊断中有潜在的应用价值。