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本论文围绕贝母中异甾体生物碱进行研究,分四部分内容。由于贝母异甾体生物碱贝母辛与兼具致畸性和抗肿瘤双重活性的环巴胺有极其相似的化学结构,为了更准确地了解贝母辛的作用以及毒性、在不同产地贝母中的含量高低情况,以期更合理、安全地使用中药贝母及其成方制剂。
本论文主要分以下几部分:1、采用HPLC-ELSD法建立了贝母中活性成分贝母辛、贝母素甲和贝母素乙的含量测定方法,并应用此方法对14个不同产地贝母中3个生物碱成分进行了含量测定,实验收集的贝母样品覆盖了2010年版《中华人民共和国药典》(一部)收载的全部5大类贝母。2、采用HPLC-MS方法分析贝母生物碱,建立了不同产地贝母特征图谱。3、应用本课题建立的HPLC-MS方法,对含贝母的中成药《蛇胆川贝胶囊》和《川贝末胶囊》进行测定,并将图谱与不同产地贝母的特征图谱进行比对,为中成药中贝母产地的鉴别提供依据。4、采用MTT法检测贝母辛、贝母素甲和贝母素乙的细胞毒性。
HPLC-ELSD实验发现,所收载的14个产地贝母中的贝母辛含量,以湖北贝母中为最高,达到0.0967mg/g,且贝母辛在不同产地的湖北贝母中含量差异较小;在平贝母中含量最低,未达到定量限。HPLC-MS实验结果表明,浙贝母、湖北贝母、平贝母和安徽贝母图谱专属性较强,单体生物碱成分特征较明显、清晰。但川贝母、暗紫贝母、梭砂贝母、瓦布贝母和浓蜜贝母等川贝母复合群成员的图谱专属性弱,实验未能将其5者区分开来。但实验结果同时也佐证了“从贝母商品角度看,可以考虑将川贝母符合群所有种类均作为川贝母来处理”的说法。应用HPLC-MS法对中成药《蛇胆川贝胶囊》和《川贝末胶囊》的研究结果表明,这两味中成药在制备生产过程中,除了使用说明书中提到的川贝母外,都还掺杂了部分浙贝母。而贝母辛、贝母素甲、贝母素乙的细胞毒性测试结果表明,三者中,贝母辛的细胞毒性最大,CC50为62.64μg/mL,贝母素甲毒性最小,CC50为153.24μg/mL。
本论文首次在标准品较少的情况下,通过文献检索,归纳出不同产地贝母中生物碱的成分及含量高低趋势。采用HPLC-MS法,通过与文献的比对,在出峰顺序一致的情况下,推断出不同产地贝母中含量较高的色谱峰的归属。本文HPLC-ELSD和HPLC-MS方法的建立,为快速、简便区分不同产地贝母提供了实验依据,并为贝母药材质量标准的建立及临床应用提供了参考。