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目的
利用RNA干扰技术敲减人肝癌细胞HepG2(中分化)和Huh-7(高分化)中MMP2基因的表达，探讨源自高转移肝癌细胞MHCC-97H的条件培养液对HepG2和Huh-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响，为进一步研究肝癌细胞异质性在肝癌侵袭转移机制中的作用提供理论依据。
方法
设计MMP2-shRNA真核表达质粒，采用脂质体将其转染至HepG2和Huh-7细胞系中，用实时荧光定量PCR和Westernblot检测MMP2在mRNA和蛋白水平的表达，明胶酶谱分析检测MMP2酶活性的改变，以明确MMP2-shRNA的抑制效果。收集MHCC-97H细胞的培养上清作为条件培养液，分别孵育转染或未转染MMP2-shRNA的HepG2细胞48h以及Huh-7细胞72h后，采用MTT法检测细胞增殖能力，使用流式细胞仪检测细胞凋亡能力，并通过Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力。
结果
MMP2-shRNA瞬时转染入HepG2和Huh-7细胞后不同时间，实时定量PCR和Westernblot结果显示，两种细胞中MMP2mRNA和蛋白表达均显著下调，HepG2细胞在转染48h后效果最佳，Huh-7细胞则在转染72h后效果显著。明胶酶谱检测证实了转染后两种细胞培养上清中MMP2活性受到抑制。MTT检测试验表明，抑制MMP2基因的表达，可有效抑制条件培养液孵育的HepG2和Huh-7细胞的增殖。流式细胞术结果显示，敲减MMP2基因可导致常规培养液和条件培养液培养的
HepG2和Huh-7细胞的凋亡率显著升高。Transwell侵袭实验证明，与常规培养液相比，条件培养液可显著诱导HepG2和Huh-7细胞侵袭能力增强，当敲减MMP2后，该诱导作用得到显著抑制。
结论
与常规培养液相比，源自MHCC-97H细胞的条件培养液可显著诱导HepG2和Huh-7细胞的增殖和侵袭，减少细胞的凋亡，表明高转移肝癌细胞可能通过旁分泌作用诱导邻近肝癌细胞恶性转化。敲低HepG2和Huh-7细胞中MMP2基因的表达，可显著抑制条件培养液的上述作用。因此，MMP2对肝癌细胞系的增殖、凋亡和侵袭能力有重要影响，可作为肝癌靶向治疗的重要靶标。
利用RNA干扰技术敲减人肝癌细胞HepG2(中分化)和Huh-7(高分化)中MMP2基因的表达，探讨源自高转移肝癌细胞MHCC-97H的条件培养液对HepG2和Huh-7细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响，为进一步研究肝癌细胞异质性在肝癌侵袭转移机制中的作用提供理论依据。
方法
设计MMP2-shRNA真核表达质粒，采用脂质体将其转染至HepG2和Huh-7细胞系中，用实时荧光定量PCR和Westernblot检测MMP2在mRNA和蛋白水平的表达，明胶酶谱分析检测MMP2酶活性的改变，以明确MMP2-shRNA的抑制效果。收集MHCC-97H细胞的培养上清作为条件培养液，分别孵育转染或未转染MMP2-shRNA的HepG2细胞48h以及Huh-7细胞72h后，采用MTT法检测细胞增殖能力，使用流式细胞仪检测细胞凋亡能力，并通过Transwell侵袭实验观察细胞侵袭能力。
结果
MMP2-shRNA瞬时转染入HepG2和Huh-7细胞后不同时间，实时定量PCR和Westernblot结果显示，两种细胞中MMP2mRNA和蛋白表达均显著下调，HepG2细胞在转染48h后效果最佳，Huh-7细胞则在转染72h后效果显著。明胶酶谱检测证实了转染后两种细胞培养上清中MMP2活性受到抑制。MTT检测试验表明，抑制MMP2基因的表达，可有效抑制条件培养液孵育的HepG2和Huh-7细胞的增殖。流式细胞术结果显示，敲减MMP2基因可导致常规培养液和条件培养液培养的
HepG2和Huh-7细胞的凋亡率显著升高。Transwell侵袭实验证明，与常规培养液相比，条件培养液可显著诱导HepG2和Huh-7细胞侵袭能力增强，当敲减MMP2后，该诱导作用得到显著抑制。
结论
与常规培养液相比，源自MHCC-97H细胞的条件培养液可显著诱导HepG2和Huh-7细胞的增殖和侵袭，减少细胞的凋亡，表明高转移肝癌细胞可能通过旁分泌作用诱导邻近肝癌细胞恶性转化。敲低HepG2和Huh-7细胞中MMP2基因的表达，可显著抑制条件培养液的上述作用。因此，MMP2对肝癌细胞系的增殖、凋亡和侵袭能力有重要影响，可作为肝癌靶向治疗的重要靶标。