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目的:1.从GABA神经调控通路探讨胃食管反流性咳嗽(GERC)气道神经源性炎症发生的外周及中枢机制,阐释中医“从胃治咳”理论的病理基础。2.探讨通降和胃方及其疏肝泄热、和胃降逆拆方对治疗胃食管反流性咳嗽的影响,揭示疏肝泄热与和胃降逆在治疗GERC气道神经源性炎症中的作用机制,为中医药治疗GERC提供科学依据。 方法:采用豚鼠食道内酸灌注的方法建立胃食管反流性咳嗽模型,用前期证实有效的通降和胃中药灌服GERC豚鼠模型;应用病理HE染色及电镜观察通降和胃方、疏肝泄热拆方、和胃降逆拆方对豚鼠气管、食管、肺病理形态学的影响;应用ELISA法观察各组气道神经肽SP、NKA、NKB、CGRP的变化;运用免疫组化、原位杂交、氨基酸分析等方法,比较各组药物对外周及中枢GABA神经通路的调控,分析GERC气道神经源性炎症发生的外周及中枢机制。 结果:(1)a:模型组豚鼠食管炎症程度显著高于正常组、全方组、奥美拉唑组(P<0.05)。b:模型组豚鼠气管、肺炎症程度显著高于正常组、全方组、奥美拉唑组(P<0.05)。经析因设计提示疏肝泄热拆方(拆方A)与和胃降逆拆方(拆方B)存在交互作用(P<0.05)。中药各治疗组与奥美拉唑组治疗作用相当。(2)模型组肺组织SP、NKA、NKB、CGRP含量均较正常组、全方组、奥美拉唑组明显升高(P<0.05)。经析因设计结果示:肺组织SP、NKA、CGRP,拆方A与拆方B存在交互作用(P<0.05);肺组织CGRP:中药各治疗组与奥美拉唑组治疗作用相当。肺组织神经肽SP:奥美拉唑组优于中药各治疗组(P<0.05)。肺组织神经肽NKA:奥美拉唑组优于全方组、疏肝泄热拆方组(P<0.05);肺组织神经肽NKB:奥美拉唑组优于各中药治疗组(P<0.05)。(3)a:外周肺GABA免疫阳性神经元表达正常组高于模型组(P<0.05)。经析因设计提示拆方A与拆方B之间不存在交互作用。中药各治疗组与奥美拉唑组比较无统计学差异。b:肺组织GABAB受体表达模型组低于正常组、全方组、奥美拉唑组(P<0.05);经析因设计提示拆方A与拆方B存在交互作用(P<0.05);中药各治疗组与奥美拉唑组疗效相当。(4)a:模型组脑GABA免疫阳性神经元显著低于正常组(P<0.05);经析因设计示拆方A与拆方B之间不存在交互作用。中药各治疗组与奥美拉唑组疗效相当。b:模型组脑GABAB受体显著低于正常组、全方组、奥美拉唑组(P<0.05):经析因设计提示拆方A与拆方B存在交互作用(P<0.05);全方与奥美拉唑组疗效相当。c:模型组豚鼠脑GABABR1mRNA表达显著低于正常组、通降和胃方组、和胃降逆拆方组(P<0.05),全方组疗效优于奥美拉唑组疗效。模型组脑GABABR2mRNA表达显著低于正常组(P<0.05)。d:模型组脑GABA含量显著低于正常组、全方组、奥美拉唑组(P<0.05),经析因设计提示拆方A与拆方B存在交互作用(P<0.05);通降和胃方组疗效优于奥美拉唑组。 结论:1.通降和胃方及其拆方能够减轻胃食管反流性咳嗽豚鼠的气管、食管、肺的病理损害,改善气道神经源性炎症,降低气道SP、CGRP、NKA、NKB的含量,其作用机制可能是通过对外周和中枢GABA神经通路的调节而发生作用。 2.通降和胃方及其拆方对GABA神经通路调控作用为:全方组优于各拆方组及模型组,提示通降和胃方对胃食管反流性咳嗽豚鼠GABA通路的调节作用,可能是通过疏肝泄热、和胃降逆的协同作用起效。3.“从胃治咳”治法具有科学性,为临床通降和胃方治疗胃食管反流性咳嗽提供了实验依据。