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目的:通过动物实验,研究我院成方胆通颗粒是否能够抑制肝细胞的凋亡,从而降低BO或OJ引起的肝脏损害,进而明确其对肝脏的保护机制,为其进一步临床应用提供理论基础。
方法:取SPF级SD大鼠80只,随机分成4组,空白对照组(KB组n=20)、生理盐水组(SL组n=20)、消炎利胆片组(XY组n=20)、胆通颗粒组(DT组n=20),除空白对照组外,其他3组均造胆道梗阻后再通模型。梗阻模型建立3天后空白对照组及生理盐水组各随机抽取5只大鼠眼眶取静脉血检测肝功,两组结果对比以确定梗阻模型是否成功。生理盐水组、消炎利胆片组及胆通颗粒组于胆道梗阻再通模型建立后分别给予生理盐水、消炎利胆片及胆通颗粒灌胃,4组分别于胆总管再通手术当天、3、7、14天处死后取4组各时间段血清及肝脏组织,采用TUNEL法进行肝细胞凋亡的原位检测;ELISA法检测肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)的表达;HE染色观察肝脏病理改变;生化检验转氨酶及胆红素变化。然后行四组检测指标统计分析。
结果:
1胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组肝脏细胞凋亡指数逐渐升高,3d时最高,解除梗阻后呈逐渐下降趋势。XY组、DT组的肝细胞凋亡指数在各时间段都明显比SL组低,且P<0.05,具有统计学意义。说明胆通颗粒能降低肝细胞凋亡,从而对胆道梗阻引起的肝脏损害具有保护作用。
2胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组TNF-R1蛋白的表达逐渐升高,3d时最高,随着梗阻解除,以及药物应用,TNF-R1呈下降趋势。但各时间段DT组、XY组的TNF-R1蛋白表达较SL相比均明显偏低,P<0.05,具有统计学意义。说明胆通颗粒能抑制TNF-R1的表达,从而能减少肝细胞的凋亡,对肝脏具有保护作用。
3胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组转氨酶和胆红素水平逐渐升高,3d时最高,梗阻解除用药后,XY组和DT组大鼠转氨酶和胆红素水平第3d呈快速下降趋势,第7d、14d缓慢下降,趋于正常,SL组呈缓慢下降趋势。XY组、DT组转氨酶和胆红素水平较SL组低,更接近于KB组,且P<0.05,具有统计学意义;说明胆通颗粒和消炎利胆片都能促进大鼠转氨酶和胆红素恢复正常,对肝脏具有保护作用。
4胆总管结扎后,SL组、XY组及DT组大鼠肝脏细胞病理变化逐渐加重,梗阻解除用药后,DT组和XY组较SL组炎性细胞浸润、脂肪变及坏死的肝细胞明显减少,且肝小叶结构恢复更快,说明说明胆通颗粒能减少炎性细胞的浸润,减少肝细胞脂肪变及坏死,保持肝脏细胞的完整性,从而有保护肝脏的作用。
方法:取SPF级SD大鼠80只,随机分成4组,空白对照组(KB组n=20)、生理盐水组(SL组n=20)、消炎利胆片组(XY组n=20)、胆通颗粒组(DT组n=20),除空白对照组外,其他3组均造胆道梗阻后再通模型。梗阻模型建立3天后空白对照组及生理盐水组各随机抽取5只大鼠眼眶取静脉血检测肝功,两组结果对比以确定梗阻模型是否成功。生理盐水组、消炎利胆片组及胆通颗粒组于胆道梗阻再通模型建立后分别给予生理盐水、消炎利胆片及胆通颗粒灌胃,4组分别于胆总管再通手术当天、3、7、14天处死后取4组各时间段血清及肝脏组织,采用TUNEL法进行肝细胞凋亡的原位检测;ELISA法检测肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)的表达;HE染色观察肝脏病理改变;生化检验转氨酶及胆红素变化。然后行四组检测指标统计分析。
结果:
1胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组肝脏细胞凋亡指数逐渐升高,3d时最高,解除梗阻后呈逐渐下降趋势。XY组、DT组的肝细胞凋亡指数在各时间段都明显比SL组低,且P<0.05,具有统计学意义。说明胆通颗粒能降低肝细胞凋亡,从而对胆道梗阻引起的肝脏损害具有保护作用。
2胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组TNF-R1蛋白的表达逐渐升高,3d时最高,随着梗阻解除,以及药物应用,TNF-R1呈下降趋势。但各时间段DT组、XY组的TNF-R1蛋白表达较SL相比均明显偏低,P<0.05,具有统计学意义。说明胆通颗粒能抑制TNF-R1的表达,从而能减少肝细胞的凋亡,对肝脏具有保护作用。
3胆总管结扎术后SL组、XY组及DT组转氨酶和胆红素水平逐渐升高,3d时最高,梗阻解除用药后,XY组和DT组大鼠转氨酶和胆红素水平第3d呈快速下降趋势,第7d、14d缓慢下降,趋于正常,SL组呈缓慢下降趋势。XY组、DT组转氨酶和胆红素水平较SL组低,更接近于KB组,且P<0.05,具有统计学意义;说明胆通颗粒和消炎利胆片都能促进大鼠转氨酶和胆红素恢复正常,对肝脏具有保护作用。
4胆总管结扎后,SL组、XY组及DT组大鼠肝脏细胞病理变化逐渐加重,梗阻解除用药后,DT组和XY组较SL组炎性细胞浸润、脂肪变及坏死的肝细胞明显减少,且肝小叶结构恢复更快,说明说明胆通颗粒能减少炎性细胞的浸润,减少肝细胞脂肪变及坏死,保持肝脏细胞的完整性,从而有保护肝脏的作用。