【摘 要】
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目的:(1)从CD-1小鼠胚胎组织克隆OP-1基因;(2)建立OP-1高效表达质粒载体;(3)制备纯化重组OP-1;(4)探讨OP-1基因克隆化、高效表达载体构建及重组OP-1制备和纯化的简单有效方法
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目的:(1)从CD-1小鼠胚胎组织克隆OP-1基因;(2)建立OP-1高效表达质粒载体;(3)制备纯化重组OP-1;(4)探讨OP-1基因克隆化、高效表达载体构建及重组OP-1制备和纯化的简单有效方法.(5)建立Wistar大鼠肾脏缺血60分钟,再灌注24小时动物实验模型,观察静脉应用重组OP-1对肾脏结构和功能损伤的预防和治疗作用;(6)进一步探讨肾脏缺血再灌往损伤的发生机制和有效的预防及治疗方法,并提供理论基础和实验依据.结论:(1)在CD-1小鼠,胚胎期约2周时有OP-1 mRNA的高水平表达.(2)RT-PCR筛选OP-1全部开放读框,产物TA克隆化方法简便、快速.(3)原核高效表达质粒pTrcHis2B含有的6xHis金属配体序列能够方便、快速回收和纯化重组蛋白,非变性状态纯化重组蛋白对重组蛋白生物活性有一定帮助.(4)重组OP-1蛋白能够有效地预防和治疗肾脏缺血再灌注性损伤,保护肾脏的结构和功能,可能是一种治疗肾脏缺血再灌注性损伤的新途径,(5)OP-1可能是通过减轻缺血再灌注对肾小管的损伤而发挥其对肾脏损伤的预防和治疗作用.
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