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目的：（1）临床送检微生物标本中铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，PA）检验、收集，生物膜形成状况、Ⅰ类整合子(IntI)检出率及耐药性统计；基于扫描电镜对铜绿假单胞菌体外生物膜产生过程进行观测；（2）对红霉素破坏之后的PA生物膜Ⅰ类整合酶基因(IntI1)mRNA表达水平进行检测，对IntI与铜绿假单胞菌生物膜受到红霉素破坏之间的联系进行讨论，由此深入研究铜绿假单胞菌生物膜受红霉素破坏的机理，促进抗生素临床选择的针对性及研发抗生素新品种。
方法：（1）全自动细菌分析仪鉴定收集、送检的微生物标本，IntI含量采用普通PCR技术鉴定，铜绿假单胞菌耐药状况采用K-B纸片法检测，铜绿假单胞菌生物膜采用银染法鉴定，采用铜绿假单胞菌菌株（可产生BF）完成生物膜体外模型构建，于24小时、48小时、72小时、120小时后在扫描电镜下分别观察铜绿假单胞菌生物膜发育情况。（2）将铜绿假单胞菌（含IntI）成膜菌株、不成膜菌株选出，本实验共划分成三组，即A组、B组、C组，三组分别是生物膜培养铜绿假单胞菌成膜菌、铜绿假单胞菌不成膜菌、液相培养条件下的生物膜培养铜绿假单胞菌成膜菌。各组全部进行组内对照，也就是加红霉素实验组1、不加红霉素对照组2。基于荧光定量PCR技术在24小时、48小时、72小时、120小时对IntI1mRNA表达水平进行分别检测。用2–CT法分析mRNA相对表达数据，统计学分析采用SPSS22软件展开。
结果：(1)本次总计分析了54例临床送检铜绿假单胞菌，检出36例样本含I类整合子菌株；药敏结果证实，和不含IntI菌株相比，含IntI菌株对抗生素（环丙沙星、头孢哌酮等）的耐药率更高，IntI在铜绿假单胞菌耐药性方面的功能由此得到证实；银染法观察，含I类整合子PA成膜率高约为80.6%，而不含I类整合子PA成膜率高约为27.8%；扫描电镜观察：PA在培养5d时可形成稳定生物膜，且含I类整合子菌株较不含I类整合子菌株形成生物膜更为密集。(2)分析了红霉素破坏铜绿假单胞菌生物膜机理，采用普通PCR技术，将铜绿假单胞菌在2种生长状态（生物膜菌、液相浮游菌）下都有IntI1mRNA的表达测出；在前述实验分组基础上，基于荧光定量PCR技术定量分析该菌IntI1mRNA转录水平，结果表明，和B2组相比，多个时间点上的A2组IntI1mRNA表达水平p≤0.01（极显著）更高，显著性（p＜0.05）高于C2组，且伴随时间的延长，差异越来越显著，1d和5d后分别是B2组的2.51、17.02倍，C2组2倍、4.06倍，证实生物膜可以促进IntI1表达；对照组和实验组，红霉素加入之后24小时，IntI1mRNA表达水平降低，红霉素加入72小时则显著性降低，其中在红霉素作用后5d差异极其显著（P≤0.01），A2、B2、C2分别为A1、B1、C1的38.56、34.07、30.21倍。从各检测点来看，和A2组相比，A1均显著下调（p＜0.05），表明红霉素会影响到IntI1mRNA表达；和B2组相比，B1显著下调（p＜0.05），证实红霉素会对IntI产生影响；和C2组相比，C1组显著下调（p＜0.05），IntI会被红霉素破坏的结论进一步得到佐证。表明：在生物膜条件下，铜绿假单胞菌可以促进整合子、有关耐药基因传播，在铜绿假单胞菌IntI破坏方面，红霉素可能发挥了某种功能。
结论：（1）铜绿假单胞菌IntI有较高的检出率，含IntI铜绿假单胞菌生物膜更易产生，耐药更易形成；（2）生物膜状态下，和液相状态相比，铜绿假单胞菌IntI1mRNA表达更明显；红霉素可能是利用对IntI表达水平的影响来破坏铜绿假单胞菌生物膜。
方法：（1）全自动细菌分析仪鉴定收集、送检的微生物标本，IntI含量采用普通PCR技术鉴定，铜绿假单胞菌耐药状况采用K-B纸片法检测，铜绿假单胞菌生物膜采用银染法鉴定，采用铜绿假单胞菌菌株（可产生BF）完成生物膜体外模型构建，于24小时、48小时、72小时、120小时后在扫描电镜下分别观察铜绿假单胞菌生物膜发育情况。（2）将铜绿假单胞菌（含IntI）成膜菌株、不成膜菌株选出，本实验共划分成三组，即A组、B组、C组，三组分别是生物膜培养铜绿假单胞菌成膜菌、铜绿假单胞菌不成膜菌、液相培养条件下的生物膜培养铜绿假单胞菌成膜菌。各组全部进行组内对照，也就是加红霉素实验组1、不加红霉素对照组2。基于荧光定量PCR技术在24小时、48小时、72小时、120小时对IntI1mRNA表达水平进行分别检测。用2–CT法分析mRNA相对表达数据，统计学分析采用SPSS22软件展开。
结果：(1)本次总计分析了54例临床送检铜绿假单胞菌，检出36例样本含I类整合子菌株；药敏结果证实，和不含IntI菌株相比，含IntI菌株对抗生素（环丙沙星、头孢哌酮等）的耐药率更高，IntI在铜绿假单胞菌耐药性方面的功能由此得到证实；银染法观察，含I类整合子PA成膜率高约为80.6%，而不含I类整合子PA成膜率高约为27.8%；扫描电镜观察：PA在培养5d时可形成稳定生物膜，且含I类整合子菌株较不含I类整合子菌株形成生物膜更为密集。(2)分析了红霉素破坏铜绿假单胞菌生物膜机理，采用普通PCR技术，将铜绿假单胞菌在2种生长状态（生物膜菌、液相浮游菌）下都有IntI1mRNA的表达测出；在前述实验分组基础上，基于荧光定量PCR技术定量分析该菌IntI1mRNA转录水平，结果表明，和B2组相比，多个时间点上的A2组IntI1mRNA表达水平p≤0.01（极显著）更高，显著性（p＜0.05）高于C2组，且伴随时间的延长，差异越来越显著，1d和5d后分别是B2组的2.51、17.02倍，C2组2倍、4.06倍，证实生物膜可以促进IntI1表达；对照组和实验组，红霉素加入之后24小时，IntI1mRNA表达水平降低，红霉素加入72小时则显著性降低，其中在红霉素作用后5d差异极其显著（P≤0.01），A2、B2、C2分别为A1、B1、C1的38.56、34.07、30.21倍。从各检测点来看，和A2组相比，A1均显著下调（p＜0.05），表明红霉素会影响到IntI1mRNA表达；和B2组相比，B1显著下调（p＜0.05），证实红霉素会对IntI产生影响；和C2组相比，C1组显著下调（p＜0.05），IntI会被红霉素破坏的结论进一步得到佐证。表明：在生物膜条件下，铜绿假单胞菌可以促进整合子、有关耐药基因传播，在铜绿假单胞菌IntI破坏方面，红霉素可能发挥了某种功能。
结论：（1）铜绿假单胞菌IntI有较高的检出率，含IntI铜绿假单胞菌生物膜更易产生，耐药更易形成；（2）生物膜状态下，和液相状态相比，铜绿假单胞菌IntI1mRNA表达更明显；红霉素可能是利用对IntI表达水平的影响来破坏铜绿假单胞菌生物膜。