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目的和背景:肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是我国常见的恶性肿瘤之一。由于难于早期发现，治疗效果往往不甚理想。近年来随着分子生物学技术的不断发展，肝癌的基因治疗已经成为当代医学研究的热点。NET-1作为新的四聚体超家族成员之一，在细胞信号转导，调节细胞黏附、移动、增生和分化中起重要作用，具有显著上调癌形成的作用。由于其在肝癌细胞中亦高表达，故有望成为肿瘤发生机制和靶向治疗研究中的工具。RNA干扰(RNAi)技术是指由与靶基因序列同源的短的双链RNA(siRNA)引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程，因此从基因水平对疾病起到治疗的作用。在RNA干扰技术的研究中，如何将治疗用的siRNA特异性导入靶细胞或者靶组织是基因治疗的关键步骤。近年来，超声靶向微泡破裂技术是一种靶向、高效、有广阔应用前景的非病毒基因传递新方法，其通过诱发细胞膜发生声孔作用，增加细胞膜通透性，进而有效促进大分子物质的胞内传输，且可避免其他基因传输方法的副作用。该实验旨在研究超声造影剂联合超声辐照介导NET-1 siRNA转染肝癌细胞。
方法：1.构建三个针对NET-1基因的siRNA和对照siRNA，通过脂质体转染法筛选出最优的siRNA。2.常规培养人肝癌细胞HepG2，将细胞分为5组：分别为对照组(A组)，NET-lsiRNA组(B组)、脂质体+NET-lsiRNA组(C组)、造影剂+NET-lsiRNA组(D组)、脂质体+造影剂+NET-lsiRNA组(E组)，后两组分别给予1.5MHz、1.0W/cm2、60s的超声辐照。治疗后在荧光显微镜下观察基因转染率，分别以RT-PCR法和Western Blot法检测细胞内NET-lmRNA和NET-1蛋白的表达情况，应用MTT法检测各组细胞增殖情况。
结果：1.有一条链的siRNA能够有效抑制NET-1的表达。2.脂质体+造影剂+超声辐照转染法与脂质体转染法相比明显提高基因转染率(P<0.05)；造影剂+超声辐照组和脂质体+造影剂+超声辐照组细胞内NET-1mRNA及NET-1蛋白的表达也均低于其他各组(P<0.05)；转染后24到72小时之间细胞增殖受到明显抑制。
结论：超声造影剂联合超声辐照可提高基因在肝癌细胞内的转染率，抑制NET-1蛋白表达，抑制肝癌细胞增殖，可能成为肝癌基因治疗的有效手段之一。