【摘 要】
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运用RT-PCR的方法从A549细胞中扩增得到了epiregulin的cDNA,将其克隆至大肠杆菌表达系统后进行了诱导表达并纯化了表达产物.对纯化的重组蛋白进行了N-端氨基酸序列测定和分子
【机 构】
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中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所
【出 处】
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中国科学院上海生物化学研究所 中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学
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运用RT-PCR的方法从A549细胞中扩增得到了epiregulin的cDNA,将其克隆至大肠杆菌表达系统后进行了诱导表达并纯化了表达产物.对纯化的重组蛋白进行了N-端氨基酸序列测定和分子量测定.随后制备了兔的重组蛋白抗血清并测定其免疫效价,以及抗血清在ELISA和Western检测中的应用.运用MTT法测定了重组蛋白对细胞生长的影响,结果表明epiregulin对层纤维细胞Balb/c 3T3有较强的生长促进作用,而对癌细胞A431的生长有明显的抑制作用.对Balb/c3T3细胞进行类似的分析则没有发生上述变化.运用Western技术对两细胞株在受到epiregulin的刺激后胞内Ras-MAPK活力变化的研究表明Balb/c3T3细胞内MAPK活力的提高要明显高于A431细胞.上述的研究结果能够解释重组蛋白epiregulin对不同细胞所表现出的截然不同的刺激活性,即细胞对epiregulin的响应取决于细胞内两条信号传导通路的平衡,在A431细胞内平衡偏向于ST6AT-p21,最终表现为细胞生长抑制,在Balb/c3T3细胞内平衡偏向于Ras-MAPK,则最终表现为细胞生长促进.
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