【摘 要】
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用活化的PEG根据正交设计在4℃时不同反应时间,不同pH值,PEG与IFN不同摩尔比进行优化,以SDS-PAGE电泳,细胞病变抑制法(WISH-VSV)为基本检测系统作检测,最后选定反应时间为2小
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用活化的PEG根据正交设计在4℃时不同反应时间,不同pH值,PEG与IFN不同摩尔比进行优化,以SDS-PAGE电泳,细胞病变抑制法(WISH-VSV)为基本检测系统作检测,最后选定反应时间为2小时,pH值为9,PEG:IFN为10:1(摩尔比)为最佳反应条件,得PEG-IFN占总蛋白的30﹪.反应终止后得到混合物用水稀释后,在阳离子交换柱上洗脱掉PEG和反应副产物,得到的PEG-IFN纯度为90﹪以上,生物活性保留度为7-10﹪.我们定义PEG修饰的IFN为PegIntron.以0.1ug/Kg给小鼠肌肉注射,定时取血,处理样品,PegIntron用未修饰的干扰素作对照,作活性检定和药代动力学实验,得其半衰期为18hr,IFN的半衰期为4hr,提高了4.5倍.这个结果表明PEG修饰干扰素使其半衰期延长是可行的.
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