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雌激素(estrogen)作为一种多效性的类固醇激素,在生殖、心血管疾病、骨质结构、肿瘤发生以及性行为等众多生理过程中起到重要的调节作用,这些生理功能是由其特异的受体分子介导实现的。这些受体主要包括雌激素的核受体和膜受体。经典的雌激素受体(estrogen receptor, ER)隶属于核受体超家族,当雌激素进入细胞核内与核受体结合后,以复合物的形式直接结合到靶基因启动子区域的ERE(estrogen responsive elements)上,或调动其他一些转录因子来调节下游基因的转录。雌激素作用于基因转录水平的这种基因组效应,一般需要很长的时间来完成。然而,人们还发现了一些快速的雌激素应答效应。其中,经典的核受体ERs可以与一些接头分子结合后,从细胞核转移到细胞膜上启动下游信号通路级联反应。近年,人们又发现了一种非核受体依赖的雌激素膜受体(G—protein coupled—receptor30,GPR30)能够介导雌激素引起的多种快速的信号通路。
本实验室已经在斑马鱼中克隆了GPR30基因,证明它能介导雌激素诱导的快速非基因组效应,并研究了它在斑马鱼精子发生过程中的作用。在此基础上,本论文侧重研究了GPR30在斑马鱼胚胎和早期发育阶段以及雌性生殖周期不同发育期的表达模式,主要结果如下:
采用半定量RT—PCR的方法,检测了斑马鱼胚胎和早期发育过程中GPR30的表达变化。GPR30 mRNA在斑马鱼整个胚胎期都有表达,其中,囊胚期的表达丰度最高,随后逐渐下降,至尾芽期和17-体节期(17-somite) GPR30表达水平最低。自5-原基期(Prim—5)开始至出膜期(3d),表达又有升高。出膜后的早期发育过程,GPR30表达稳定。
采用实时荧光定量PCR的方法,对斑马鱼生殖周期不同阶段卵巢和脑中GPR30 mRNA的表达进行了研究,结果表明,卵巢中GPR30的转录水平在卵黄形成阶段的早期开始升高,至中期后,表达急剧提高,卵黄形成晚期又急剧下降。脑中GPR30 mRNA的表达变化趋势与卵巢中大致相同,在卵黄形成阶段的早、中期GPR30 mRNA的表达逐渐增加,晚期表达下降到卵黄形成前期的水平。退化期的脑和卵巢中几乎没有GPR30的表达。结果表明脑和卵巢中的GPR30可能参与了斑马鱼生殖周期中早期卵黄生成的调节。
采用原位杂交的方法,对雌性斑马鱼生殖周期不同阶段卵巢组织中GPR30的表达进行了细胞定位。结果显示,在卵黄生成前期,GPR30在卵母细胞和滤泡细胞中都有表达,而且滤泡细胞中的信号较强。在卵黄生成的早期、中期和晚期,滤泡细胞的颗粒细胞和膜细胞中都检测到GPR30的表达,而在卵母细胞中没有检测到GPR30的表达。