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一、目的
头颈部癌(Head neck cancer，HNC)包括起源于口腔、咽、喉、鼻腔、鼻窦等部位的上皮性恶性肿瘤，是常见的恶性肿瘤，占恶性肿瘤的6％，病理类型几乎为鳞癌。全世界每年报告约650000例头颈部鳞状细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)新发病例，其中35000例死亡。目前，对于HNSCC患者的治疗都是基于肿瘤分期和潜在位置，而基于潜在生物学的治疗很少，尽管技术和治疗方面的进步改善了HNSCC患者的生活质量，但由于手术后局部复发和远处转移，总体预后仍然很差。因此，从分子水平来了解HNSCC作用机制，为患者提供更好的改善、预防及个性化治疗。
骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是一种N-磷酸化糖蛋白，含有大约三百个氨基酸残基。近年来，OPN在肿瘤中的研究越来越受到重视，大量的实验表明OPN的高表达与肿瘤晚期的转移以及不良预后有关。OPN可激活多种致癌基因，调控血管生成分子促进肿瘤生长、转移和血管生成。本文主要探讨OPN参与HNSCC发生和发展中的作用及调控机制。
二、方法
1、确定OPN在哺乳动物头颈部鳞状细胞癌组织中的表达
(1)收集临床头颈部鳞癌组织标本及癌旁组织作为对照组。
(2)用Real-timePCR和Westernblot检测样本OPN的差异表达。
(3)用免疫组化方法检测OPN在头颈部鳞癌的表达与定位。
2、分析OPN对头颈部鳞癌细胞增殖和侵袭影响
(1)选取两株头颈部鳞癌细胞分别为口腔鳞状细胞癌-6(UM-SCC6)细胞和鼻咽鳞状细胞癌-2(CNE-2)细胞进行传代培养。
(2)转染OPN-siRNA和Over-OPN至UM-SCC6和CNE-2内，分别调控OPN表达水平。
(3)应用CCK8实验、集落形成实验及Ki67实验检测调控细胞OPN对细胞增殖能力的影响;应用Westernblot实验检测调控OPN表达对凋亡相关因子Capase-3和Bcl-2表达影响。
(4)应用Transwell小室实验检测调控细胞OPN表达对细胞侵袭能力的影响及Westrenblot实验检测侵袭相关因子MMP2和MMP9表达变化。
3、分析OPN调控头颈部鳞癌的分子机制
(1)转染OPN-siRNA和Over-OPN至UM-SCC6细胞和CNE-2细胞内。
(2)加入p38MAPK抑制剂SB203580，检测不同表达水平的OPN对p38MAPK信号通路分子表达的影响。
三、结果
1、OPN在哺乳动物头颈部鳞状细胞癌组织中的表达
(1)Real-timePCR和Westrenblot结果显示:与癌旁组织相比，OPN在头颈部鳞癌组织中高表达。
(2)免疫组化实验结果显示:头颈部鳞状细胞癌中OPN的阳性细胞数表达高于对照组;OPN蛋白的阳性染色主要位于细胞质，在细胞膜及组织间隙有少量的染色。
2、OPN对头颈部鳞癌细胞增殖和侵袭影响
(1)OPN能够促进细胞的增殖。CCK8、集落形成和Ki67实验结果显示，转染OPN-siRNA下调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够抑制细胞的增殖;转染Over-OPN上调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够促进细胞的增殖。Westernblot实验结果显示:与对照组相比下调OPN后Capase-3和Bcl-2表达增高。
(2)OPN能够促进细胞的侵袭。Transwell小室结果显示:转染OPN-siRNA下调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够抑制细胞侵袭，Westernblot结果显示MMP2和MMP9表达降低;转染Over-OPN上调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够促进细胞的侵袭，Westernblot结果显示上调OPN后与对照组相比MMP2和MMP9表达增高。
3、OPN能够激活p38MAPK信号通路调控头颈部鳞癌细胞的增殖和侵袭能力
Westernblot结果显示:转染OPN-siRNA后与对照组相比p-p38表达降低，加入SB032580抑制剂后与单独加OPN-siRNA组相比p-p38表达明显降低;转染Over-OPN后p-p38表达升高，加入SB032580抑制剂后与单独加Over-OPN组p-p38表达降低。
四、结论
1、OPN在人头颈部鳞癌组织中表达高于癌旁组织。
2、OPN能够影响UM-SCC6细胞和CNE-2细胞的增殖和侵袭。
3、OPN可能是通过p38MAPK信号通路调控UM-SCC6细胞和CNE-2细胞的增殖和侵袭能力。
头颈部癌(Head neck cancer，HNC)包括起源于口腔、咽、喉、鼻腔、鼻窦等部位的上皮性恶性肿瘤，是常见的恶性肿瘤，占恶性肿瘤的6％，病理类型几乎为鳞癌。全世界每年报告约650000例头颈部鳞状细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)新发病例，其中35000例死亡。目前，对于HNSCC患者的治疗都是基于肿瘤分期和潜在位置，而基于潜在生物学的治疗很少，尽管技术和治疗方面的进步改善了HNSCC患者的生活质量，但由于手术后局部复发和远处转移，总体预后仍然很差。因此，从分子水平来了解HNSCC作用机制，为患者提供更好的改善、预防及个性化治疗。
骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)是一种N-磷酸化糖蛋白，含有大约三百个氨基酸残基。近年来，OPN在肿瘤中的研究越来越受到重视，大量的实验表明OPN的高表达与肿瘤晚期的转移以及不良预后有关。OPN可激活多种致癌基因，调控血管生成分子促进肿瘤生长、转移和血管生成。本文主要探讨OPN参与HNSCC发生和发展中的作用及调控机制。
二、方法
1、确定OPN在哺乳动物头颈部鳞状细胞癌组织中的表达
(1)收集临床头颈部鳞癌组织标本及癌旁组织作为对照组。
(2)用Real-timePCR和Westernblot检测样本OPN的差异表达。
(3)用免疫组化方法检测OPN在头颈部鳞癌的表达与定位。
2、分析OPN对头颈部鳞癌细胞增殖和侵袭影响
(1)选取两株头颈部鳞癌细胞分别为口腔鳞状细胞癌-6(UM-SCC6)细胞和鼻咽鳞状细胞癌-2(CNE-2)细胞进行传代培养。
(2)转染OPN-siRNA和Over-OPN至UM-SCC6和CNE-2内，分别调控OPN表达水平。
(3)应用CCK8实验、集落形成实验及Ki67实验检测调控细胞OPN对细胞增殖能力的影响;应用Westernblot实验检测调控OPN表达对凋亡相关因子Capase-3和Bcl-2表达影响。
(4)应用Transwell小室实验检测调控细胞OPN表达对细胞侵袭能力的影响及Westrenblot实验检测侵袭相关因子MMP2和MMP9表达变化。
3、分析OPN调控头颈部鳞癌的分子机制
(1)转染OPN-siRNA和Over-OPN至UM-SCC6细胞和CNE-2细胞内。
(2)加入p38MAPK抑制剂SB203580，检测不同表达水平的OPN对p38MAPK信号通路分子表达的影响。
三、结果
1、OPN在哺乳动物头颈部鳞状细胞癌组织中的表达
(1)Real-timePCR和Westrenblot结果显示:与癌旁组织相比，OPN在头颈部鳞癌组织中高表达。
(2)免疫组化实验结果显示:头颈部鳞状细胞癌中OPN的阳性细胞数表达高于对照组;OPN蛋白的阳性染色主要位于细胞质，在细胞膜及组织间隙有少量的染色。
2、OPN对头颈部鳞癌细胞增殖和侵袭影响
(1)OPN能够促进细胞的增殖。CCK8、集落形成和Ki67实验结果显示，转染OPN-siRNA下调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够抑制细胞的增殖;转染Over-OPN上调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够促进细胞的增殖。Westernblot实验结果显示:与对照组相比下调OPN后Capase-3和Bcl-2表达增高。
(2)OPN能够促进细胞的侵袭。Transwell小室结果显示:转染OPN-siRNA下调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够抑制细胞侵袭，Westernblot结果显示MMP2和MMP9表达降低;转染Over-OPN上调UM-SCC6细胞和CNE-2细胞OPN表达，能够促进细胞的侵袭，Westernblot结果显示上调OPN后与对照组相比MMP2和MMP9表达增高。
3、OPN能够激活p38MAPK信号通路调控头颈部鳞癌细胞的增殖和侵袭能力
Westernblot结果显示:转染OPN-siRNA后与对照组相比p-p38表达降低，加入SB032580抑制剂后与单独加OPN-siRNA组相比p-p38表达明显降低;转染Over-OPN后p-p38表达升高，加入SB032580抑制剂后与单独加Over-OPN组p-p38表达降低。
四、结论
1、OPN在人头颈部鳞癌组织中表达高于癌旁组织。
2、OPN能够影响UM-SCC6细胞和CNE-2细胞的增殖和侵袭。
3、OPN可能是通过p38MAPK信号通路调控UM-SCC6细胞和CNE-2细胞的增殖和侵袭能力。