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感音神经性耳聋是临床上常见的感觉缺陷性疾病之一,主要由遗传、噪声、药物损伤等原因造成,目前认为利用内耳干细胞再生毛细胞是治疗感音神经性耳聋的根本方法。Wnt 信号通路下游靶基因Lgr5 是内耳干细胞的标记物,Wnt 信号能够促进内耳干细胞的增殖分化并再生毛细胞。Frizzled-9 (Fzd9)是Wnt信号的受体之一,是大脑中神经元干细胞的标记物和人类胎盘、骨髓间充质干细胞的标记物。目前 Fzd9 在小鼠耳蜗中的表达和作用尚无研究。因此,我们利用 Fzd9-CreER 转基因小鼠,在新生鼠耳蜗中标记和谱系追踪Fzd9+细胞并对其进行体外培养来研究Fzd9+细胞是否具有内耳干细胞的特性。
我们的研究结果显示,在P3新生小鼠耳蜗中,Fzd9只标记了支持细胞中的内指细胞(Inner phalangeal cells)、内边界细胞(Inner border cells)和第三排Deiters细胞(third-row Deiters’ cells),在数量及种类上均比Lgr5标记的细胞更少。随着小鼠年龄的增长,Fzd9表达量逐渐降低,在P14后检测不到表达。我们进一步通过体内谱系追踪实验,发现新生小鼠耳蜗 Fzd9+细胞具有再生毛细胞的能力,并且再生毛细胞的数量与 Lgr5+内耳干细胞再生毛细胞的数量没有显著差异。在体外实验中,通过体外培养流式筛选的新生小鼠耳蜗Fzd9+细胞发现,Fzd9+细胞在体外具有成球和分化为Myo7a+细胞的能力,并且其成球数量和直径以及体外分化能力与Lgr5+内耳干细胞无显著差异。
因此,我们的研究证明新生小鼠耳蜗Fzd9+细胞具有内耳干细胞的特性,在体内和体外均具有再生毛细胞的能力,并且与Lgr5+内耳干细胞增殖分化和再生毛细胞的能力没有显著差异。因此我们认为 Fzd9 可以作为标记更少支持细胞类型的内耳干细胞的标记物。
我们的研究结果显示,在P3新生小鼠耳蜗中,Fzd9只标记了支持细胞中的内指细胞(Inner phalangeal cells)、内边界细胞(Inner border cells)和第三排Deiters细胞(third-row Deiters’ cells),在数量及种类上均比Lgr5标记的细胞更少。随着小鼠年龄的增长,Fzd9表达量逐渐降低,在P14后检测不到表达。我们进一步通过体内谱系追踪实验,发现新生小鼠耳蜗 Fzd9+细胞具有再生毛细胞的能力,并且再生毛细胞的数量与 Lgr5+内耳干细胞再生毛细胞的数量没有显著差异。在体外实验中,通过体外培养流式筛选的新生小鼠耳蜗Fzd9+细胞发现,Fzd9+细胞在体外具有成球和分化为Myo7a+细胞的能力,并且其成球数量和直径以及体外分化能力与Lgr5+内耳干细胞无显著差异。
因此,我们的研究证明新生小鼠耳蜗Fzd9+细胞具有内耳干细胞的特性,在体内和体外均具有再生毛细胞的能力,并且与Lgr5+内耳干细胞增殖分化和再生毛细胞的能力没有显著差异。因此我们认为 Fzd9 可以作为标记更少支持细胞类型的内耳干细胞的标记物。