论文部分内容阅读
【目的】
1.建立沙鼠高脂模型，观察高脂饮食沙鼠血脂水平及肝脏脂肪累积。
2.研究不同剂量甲基原薯蓣皂苷(methyl protodioscin，MPD)对高脂沙鼠血脂水平和肝脂代谢的影响。
3.分析MPD对高脂沙鼠血脂及肝脂质代谢影响的潜在机制，为中药活性成分MPD在临床上治疗高脂血症提供实验资料。
【方法】
1.选取体重40～60g的雄性沙鼠50只，单笼普通维持饲料适应性喂养1周后，戊巴比妥钠腹腔麻醉，眶静脉丛血取血并离心，检测血脂四项和丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase， AST)。将50只沙鼠按每组10只随机分成5组，正常组、模型组、MPD低剂量组、MPD高剂量组和阳性药物组。模型组、低剂量组、高剂量组和阳性药物组给予高脂饲料喂养6周，正常组给予普通维持饲料喂养6周，每周检测TC、TG、LDL-c、HDL-c和ALT、AST及体重。
2.造模成功后，开始给药。低剂量组和高剂量组分别给予25mg/kg/d和50mg/kg/d的MPD灌胃，阳性药物组给予4.8mg/kg/d辛伐他汀灌胃，连续给药6周，每周检测TC、TG、LDL-c、HDL-c和ALT、AST及体重。
3.戊巴比妥钠麻醉、取血，颈椎脱臼处死，取肝脏称重、拍照，计算肝重指数。
4.将每只鼠肝脏分为两部分，一部分用多4%聚甲醛固定，包埋制作石蜡切片，进行HE染色，观察各组肝脂肪变性程度，并测定各组肝脏总TC、TG的含量。另一部分进行蛋白提取，分析各组肝脏脂质代谢相关基因SREBP1、SREBP2、HMGCR、ACC、FASN、LDLR、PCSK9、ABCA1等表达改变。
5.在显微解剖台上，仔细剥离全长主动脉，由主动脉根部剥离至髂总动脉分叉处，并进行全长动脉油红染色观察动脉是否有肉眼可见斑块形成。每组随机取5只全长动脉制作冰冻切片，油红染色，观察镜下斑块。
【结果】
1.成功构建高脂沙鼠模型，高脂喂养6周后，所有模型鼠TC、TG、LDL-c水平均高于正常组，差异具有统计意义(P＜0.05)。肉眼可见模型鼠肝脏体积增大，轻度肿胀，包膜紧张，肝脏颜色呈灰黄色，有油腻感。
2.HE切片显示模型鼠肝切片出现大小不一的空泡，肝细胞肿胀，细胞核偏向一侧。
3.肝脏TC测定结果显示，MPD治疗6周后，高剂量组与阳性药物组TC较模型组分别降低了51.17%和49.32%，差异有统计学意义(P＜0.05)，低剂量组与模型组差异无统计学意义(P＞0.05)。肝脏TG结果显示，与模型组相比，低剂量组、高剂量组和阳性药物组TG浓度分别下降21.50%、49.39%、25.57%，高剂量组肝脏TG浓度与模型组差异有统计学意义(P＜0.01)。
4.肝重系数显示，低剂量组和高剂量组肝重系数与模型组相比，分别降低16.54%、39.70%(P＜0.0001)；高剂量组与低剂量组相比，降低了27.50%(P＜0.0001)。阳性药物组肝脏系数无明显下降，差异无统计学意义(P＞0.05)。
5.血浆ALT和AST检测显示，低剂量组和高剂量组AST均较模型组低，且差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.001)，阳性药物组AST较模型组差异无明显差异(P＞0.05)。低剂量组和高剂量组ALT均较模型组显著降低，分别降低了56.85%和62.48%，与正常组相近，差异无统计学意义(P＞0.05)。
6.血浆TC、TG、LDL-c检测显示，高脂喂养6周后TC、TG、LDL-c均较正常组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。血浆TC结果显示，经过6周MPD治疗后，低剂量组和高剂量组分别降低了71.14%、78.17%，与高脂组相比差异有统计学意义(P＜0.0001)，阳性药物组亦有明显下降趋势，下降了76.37%(P＜0.0001)。MPD治疗6周后，低剂量组和高剂量组的血浆TG水平呈递减趋势，分别下降了60.76%(P＜0.001)和70.09%(P＜0.0001)。低剂量组和高剂量组LDL-c较模型组分别降低了57.19%(P＜0.01)和67.92%(P＜0.001)，阳性药物组较模型组降低了66.56%(P＜0.05)。
7.Westernblot分析显示，MPD可抑制肝脏TG代谢相关蛋白ACC、FASN、SREBP1表达，且呈剂量依赖性。MPD降低肝脏PCSK9的表达，提高肝脏LDL-c受体LDLR的表达。MPD可抑制TC合成关键酶HMGCR、SREBP2表达，并剂量依赖性。MPD也增强了ABCA1的表达。
8.全长动脉油红染色，没发现肉眼可见斑块；主动脉根部冰冻切片观察，高脂组斑块明显，而MPD减轻了斑块的形成。
【结论】
1.高脂喂养6周可构建高脂模型沙鼠，并使肝脂肪变性。
2.MPD可能通过提高ABCA1的表达，促进胆固醇的逆向转运，抑制肝脏HMGCR、SREBP2合成，降低血液和肝脏TC的浓度。
3.MPD可能抑制肝脏PCSK9表达，提高肝细胞表面LDLR，加速血液中LDL-c的代谢，同时抑制肝脏TG合成相关酶ACC和FASN，减轻肝脏脂肪累积。
4.MPD可降低高脂沙鼠ALT和AST水平，具有保护高脂沙鼠肝功能。
1.建立沙鼠高脂模型，观察高脂饮食沙鼠血脂水平及肝脏脂肪累积。
2.研究不同剂量甲基原薯蓣皂苷(methyl protodioscin，MPD)对高脂沙鼠血脂水平和肝脂代谢的影响。
3.分析MPD对高脂沙鼠血脂及肝脂质代谢影响的潜在机制，为中药活性成分MPD在临床上治疗高脂血症提供实验资料。
【方法】
1.选取体重40～60g的雄性沙鼠50只，单笼普通维持饲料适应性喂养1周后，戊巴比妥钠腹腔麻醉，眶静脉丛血取血并离心，检测血脂四项和丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase，ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate transaminase， AST)。将50只沙鼠按每组10只随机分成5组，正常组、模型组、MPD低剂量组、MPD高剂量组和阳性药物组。模型组、低剂量组、高剂量组和阳性药物组给予高脂饲料喂养6周，正常组给予普通维持饲料喂养6周，每周检测TC、TG、LDL-c、HDL-c和ALT、AST及体重。
2.造模成功后，开始给药。低剂量组和高剂量组分别给予25mg/kg/d和50mg/kg/d的MPD灌胃，阳性药物组给予4.8mg/kg/d辛伐他汀灌胃，连续给药6周，每周检测TC、TG、LDL-c、HDL-c和ALT、AST及体重。
3.戊巴比妥钠麻醉、取血，颈椎脱臼处死，取肝脏称重、拍照，计算肝重指数。
4.将每只鼠肝脏分为两部分，一部分用多4%聚甲醛固定，包埋制作石蜡切片，进行HE染色，观察各组肝脂肪变性程度，并测定各组肝脏总TC、TG的含量。另一部分进行蛋白提取，分析各组肝脏脂质代谢相关基因SREBP1、SREBP2、HMGCR、ACC、FASN、LDLR、PCSK9、ABCA1等表达改变。
5.在显微解剖台上，仔细剥离全长主动脉，由主动脉根部剥离至髂总动脉分叉处，并进行全长动脉油红染色观察动脉是否有肉眼可见斑块形成。每组随机取5只全长动脉制作冰冻切片，油红染色，观察镜下斑块。
【结果】
1.成功构建高脂沙鼠模型，高脂喂养6周后，所有模型鼠TC、TG、LDL-c水平均高于正常组，差异具有统计意义(P＜0.05)。肉眼可见模型鼠肝脏体积增大，轻度肿胀，包膜紧张，肝脏颜色呈灰黄色，有油腻感。
2.HE切片显示模型鼠肝切片出现大小不一的空泡，肝细胞肿胀，细胞核偏向一侧。
3.肝脏TC测定结果显示，MPD治疗6周后，高剂量组与阳性药物组TC较模型组分别降低了51.17%和49.32%，差异有统计学意义(P＜0.05)，低剂量组与模型组差异无统计学意义(P＞0.05)。肝脏TG结果显示，与模型组相比，低剂量组、高剂量组和阳性药物组TG浓度分别下降21.50%、49.39%、25.57%，高剂量组肝脏TG浓度与模型组差异有统计学意义(P＜0.01)。
4.肝重系数显示，低剂量组和高剂量组肝重系数与模型组相比，分别降低16.54%、39.70%(P＜0.0001)；高剂量组与低剂量组相比，降低了27.50%(P＜0.0001)。阳性药物组肝脏系数无明显下降，差异无统计学意义(P＞0.05)。
5.血浆ALT和AST检测显示，低剂量组和高剂量组AST均较模型组低，且差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.001)，阳性药物组AST较模型组差异无明显差异(P＞0.05)。低剂量组和高剂量组ALT均较模型组显著降低，分别降低了56.85%和62.48%，与正常组相近，差异无统计学意义(P＞0.05)。
6.血浆TC、TG、LDL-c检测显示，高脂喂养6周后TC、TG、LDL-c均较正常组明显升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。血浆TC结果显示，经过6周MPD治疗后，低剂量组和高剂量组分别降低了71.14%、78.17%，与高脂组相比差异有统计学意义(P＜0.0001)，阳性药物组亦有明显下降趋势，下降了76.37%(P＜0.0001)。MPD治疗6周后，低剂量组和高剂量组的血浆TG水平呈递减趋势，分别下降了60.76%(P＜0.001)和70.09%(P＜0.0001)。低剂量组和高剂量组LDL-c较模型组分别降低了57.19%(P＜0.01)和67.92%(P＜0.001)，阳性药物组较模型组降低了66.56%(P＜0.05)。
7.Westernblot分析显示，MPD可抑制肝脏TG代谢相关蛋白ACC、FASN、SREBP1表达，且呈剂量依赖性。MPD降低肝脏PCSK9的表达，提高肝脏LDL-c受体LDLR的表达。MPD可抑制TC合成关键酶HMGCR、SREBP2表达，并剂量依赖性。MPD也增强了ABCA1的表达。
8.全长动脉油红染色，没发现肉眼可见斑块；主动脉根部冰冻切片观察，高脂组斑块明显，而MPD减轻了斑块的形成。
【结论】
1.高脂喂养6周可构建高脂模型沙鼠，并使肝脂肪变性。
2.MPD可能通过提高ABCA1的表达，促进胆固醇的逆向转运，抑制肝脏HMGCR、SREBP2合成，降低血液和肝脏TC的浓度。
3.MPD可能抑制肝脏PCSK9表达，提高肝细胞表面LDLR，加速血液中LDL-c的代谢，同时抑制肝脏TG合成相关酶ACC和FASN，减轻肝脏脂肪累积。
4.MPD可降低高脂沙鼠ALT和AST水平，具有保护高脂沙鼠肝功能。