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【目的】
研究GAS5基因的表达变化对鼻咽癌细胞增殖、周期、凋亡及迁移侵袭的影响，并初步探讨鼻咽癌细胞中GAS5与microRNA的ceRNA机制对细胞增殖能力的影响。
【方法】
首先采用实时荧光定量PCR技术检测GAS5在鼻咽癌细胞中的表达情况，筛选出待研究的靶细胞株。然后构建GAS5过表达重组质粒转染鼻咽癌细胞，采用MTT实验、平板克隆形成实验及流式细胞术检测GAS5对鼻咽癌细胞增殖能力及周期的影响；采用DAPI染色及AnnexinV-FITC/PI流式细胞仪检测GAS5对鼻咽癌细胞凋亡的影响，并通过Westernblot实验检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化情况；通过划痕实验、Transwell小室迁移侵袭实验检测GAS5对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的影响，并进一步采用Westernblot实验检测迁移侵袭相关蛋白的表达水平变化；采用生物信息学技术、RT-qPCR技术及双荧光素酶基因报告实验预测以及验证与GAS5相互作用的microRNA，并进一步采用MTT试验和平板克隆形成实验验证GAS5与microRNA的负调控作用对鼻咽癌细胞增殖能力的影响。
【结果】
1.RT-qPCR检测表明，GAS5在鼻咽癌细胞系中低表达。根据GAS5的表达情况，后续实验选择CNE-1细胞为待研究细胞。
2.MTT实验及平板克隆形成实验检测结果显示，GAS5可抑制CNE-1细胞的生长增殖能力；PI染色后流式细胞术检测显示，GAS5可以阻滞细胞周期于S期。
3.DAPI染色实验及AnnexinV-FITC/PI流式细胞仪结果显示，GAS5可以促进CNE-1细胞凋亡，Westernblot结果显示过表达GAS5后，Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平下降，Bax、cleavedCaspase-3蛋白表达水平升高。
4.划痕实验及Transwell迁移侵袭实验结果显示，过表达GAS5可以抑制CNE-1细胞的迁移侵袭能力，Westernblot实验结果显示Vimentin、β-catenin及MMP2的蛋白表达水平显著降低，E-cadherin蛋白表达水平升高。
5.StarBase数据库预测出可能与GAS5相互作用的microRNA有36个，根据文献查阅，后续试验选择miR-18b-5p作为研究靶标。
6.RT-qPCR结果显示过表达GAS5的CNE-1细胞低表达miR-18b-5p，同时双荧光素酶报告基因试验显示GAS5与miR-18b-5p可以通过结合靶点相互作用，降低对方的表达。
7.MTT实验及平板克隆形成实验结果显示，miR-18b-5p可以促进CNE-1细胞的增殖能力，而GAS5与miR-18b-5p共转染可以部分逆转GAS5对CNE-1细胞增殖能力的抑制作用。
【结论】
GAS5在鼻咽癌细胞中低表达；GAS5可抑制鼻咽癌细胞体外增殖、迁移侵袭的能力，可促进细胞凋亡，阻滞细胞周期于S期。GAS5的抗鼻咽癌细胞增殖作用可能是通过抑制miR-18b-5p表达，从而间接影响miR-18b-5p下游靶基因的表达而实现的。
研究GAS5基因的表达变化对鼻咽癌细胞增殖、周期、凋亡及迁移侵袭的影响，并初步探讨鼻咽癌细胞中GAS5与microRNA的ceRNA机制对细胞增殖能力的影响。
【方法】
首先采用实时荧光定量PCR技术检测GAS5在鼻咽癌细胞中的表达情况，筛选出待研究的靶细胞株。然后构建GAS5过表达重组质粒转染鼻咽癌细胞，采用MTT实验、平板克隆形成实验及流式细胞术检测GAS5对鼻咽癌细胞增殖能力及周期的影响；采用DAPI染色及AnnexinV-FITC/PI流式细胞仪检测GAS5对鼻咽癌细胞凋亡的影响，并通过Westernblot实验检测细胞凋亡相关蛋白的表达变化情况；通过划痕实验、Transwell小室迁移侵袭实验检测GAS5对鼻咽癌细胞迁移侵袭能力的影响，并进一步采用Westernblot实验检测迁移侵袭相关蛋白的表达水平变化；采用生物信息学技术、RT-qPCR技术及双荧光素酶基因报告实验预测以及验证与GAS5相互作用的microRNA，并进一步采用MTT试验和平板克隆形成实验验证GAS5与microRNA的负调控作用对鼻咽癌细胞增殖能力的影响。
【结果】
1.RT-qPCR检测表明，GAS5在鼻咽癌细胞系中低表达。根据GAS5的表达情况，后续实验选择CNE-1细胞为待研究细胞。
2.MTT实验及平板克隆形成实验检测结果显示，GAS5可抑制CNE-1细胞的生长增殖能力；PI染色后流式细胞术检测显示，GAS5可以阻滞细胞周期于S期。
3.DAPI染色实验及AnnexinV-FITC/PI流式细胞仪结果显示，GAS5可以促进CNE-1细胞凋亡，Westernblot结果显示过表达GAS5后，Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平下降，Bax、cleavedCaspase-3蛋白表达水平升高。
4.划痕实验及Transwell迁移侵袭实验结果显示，过表达GAS5可以抑制CNE-1细胞的迁移侵袭能力，Westernblot实验结果显示Vimentin、β-catenin及MMP2的蛋白表达水平显著降低，E-cadherin蛋白表达水平升高。
5.StarBase数据库预测出可能与GAS5相互作用的microRNA有36个，根据文献查阅，后续试验选择miR-18b-5p作为研究靶标。
6.RT-qPCR结果显示过表达GAS5的CNE-1细胞低表达miR-18b-5p，同时双荧光素酶报告基因试验显示GAS5与miR-18b-5p可以通过结合靶点相互作用，降低对方的表达。
7.MTT实验及平板克隆形成实验结果显示，miR-18b-5p可以促进CNE-1细胞的增殖能力，而GAS5与miR-18b-5p共转染可以部分逆转GAS5对CNE-1细胞增殖能力的抑制作用。
【结论】
GAS5在鼻咽癌细胞中低表达；GAS5可抑制鼻咽癌细胞体外增殖、迁移侵袭的能力，可促进细胞凋亡，阻滞细胞周期于S期。GAS5的抗鼻咽癌细胞增殖作用可能是通过抑制miR-18b-5p表达，从而间接影响miR-18b-5p下游靶基因的表达而实现的。