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循环放大技术广泛应用于生物分析检测,通过使用各种酶切靶标循环、滚环扩增等放大方法,可以有效提高核酸和蛋白检测的灵敏度。利用各种放大技术设计高灵敏、高特异性的生物传感器成为人们不断追求的目标。本论文主要结合了循环放大技术、生物沉淀技术,通过石英晶体微天平(QCM)检测、荧光检测等方法实现了溶菌酶和p53基因的高灵敏度检测。以下是论文包含的内容: 1、设计了简单的DNA三明治夹心结构,以考察生物沉淀反应在石英晶体微天平检测中的应用。通过间接地将辣根过氧化物酶(HRP)连接到金片上,HRP催化生物沉淀反应生成沉淀附着在金片上,使石英晶体微天平的响应信号增强,实现对目标DNA的检测。在最佳实验条件下,目标DNA的浓度在1.0×10-11到1.0×10-8 M时,表现出较好的线性关系,线性回归方程为:-△F=76.63 lgC+881.37(-△F为石英晶体微天平频率信号增大值,C为目标DNA浓度,R=0.9954),检测限为4.0 pM(3σ)。 2、研制了一种新颖的利用生物沉淀反应放大石英晶体微天平的频率信号检测溶菌酶的新方法。为了检测溶菌酶,实验首先利用Au-S键的相互作用,将引物固定到芯片上,通过循环放大技术及生物沉淀反应,建立特异性识别溶菌酶的生物传感器。该方法通过DNA剪切循环、滚环扩增技术和生物沉淀反应使石英晶体微天平的信号增强,实现对溶菌酶的检测,具有较高的选择性和灵敏度。在最佳实验条件下,溶菌酶的浓度在1.0×10-15到5.0×10-12M时,表现出较好的线性关系,线性回归方程为:-△F=78.30 log10C+1194.76(-△F为石英晶体微天平频率信号增大值,C为溶菌酶浓度,R=0.9964),检测限为0.3 fM(3σ)。 3、研制了一种基于功能化DNAzyme和循环放大技术检测p53基因的新方法。通过ExoⅢ和功能化DNAzyme的作用,经过三个循环放大过程,使荧光信号大大增强。在p53的浓度1.0×10-14到1.0×10-10M之间时,表现出较好的线性关系,此时的线性回归方程为: F=145.05 lgC+2253.1(F为荧光强度,C为p53基因浓度,R=0.9988)。该方法能够测得的p53基因的检测限是3.0 fM,通过该方法检测出的p53基因检测限低,对于微量p53基因的检测具有重要意义。该方法具有操作简单、效率高、灵敏度高、费用低等优点。