基于循环放大技术检测DNA及蛋白质

来源 :青岛科技大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sky011
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
循环放大技术广泛应用于生物分析检测,通过使用各种酶切靶标循环、滚环扩增等放大方法,可以有效提高核酸和蛋白检测的灵敏度。利用各种放大技术设计高灵敏、高特异性的生物传感器成为人们不断追求的目标。本论文主要结合了循环放大技术、生物沉淀技术,通过石英晶体微天平(QCM)检测、荧光检测等方法实现了溶菌酶和p53基因的高灵敏度检测。以下是论文包含的内容:  1、设计了简单的DNA三明治夹心结构,以考察生物沉淀反应在石英晶体微天平检测中的应用。通过间接地将辣根过氧化物酶(HRP)连接到金片上,HRP催化生物沉淀反应生成沉淀附着在金片上,使石英晶体微天平的响应信号增强,实现对目标DNA的检测。在最佳实验条件下,目标DNA的浓度在1.0×10-11到1.0×10-8 M时,表现出较好的线性关系,线性回归方程为:-△F=76.63 lgC+881.37(-△F为石英晶体微天平频率信号增大值,C为目标DNA浓度,R=0.9954),检测限为4.0 pM(3σ)。  2、研制了一种新颖的利用生物沉淀反应放大石英晶体微天平的频率信号检测溶菌酶的新方法。为了检测溶菌酶,实验首先利用Au-S键的相互作用,将引物固定到芯片上,通过循环放大技术及生物沉淀反应,建立特异性识别溶菌酶的生物传感器。该方法通过DNA剪切循环、滚环扩增技术和生物沉淀反应使石英晶体微天平的信号增强,实现对溶菌酶的检测,具有较高的选择性和灵敏度。在最佳实验条件下,溶菌酶的浓度在1.0×10-15到5.0×10-12M时,表现出较好的线性关系,线性回归方程为:-△F=78.30 log10C+1194.76(-△F为石英晶体微天平频率信号增大值,C为溶菌酶浓度,R=0.9964),检测限为0.3 fM(3σ)。  3、研制了一种基于功能化DNAzyme和循环放大技术检测p53基因的新方法。通过ExoⅢ和功能化DNAzyme的作用,经过三个循环放大过程,使荧光信号大大增强。在p53的浓度1.0×10-14到1.0×10-10M之间时,表现出较好的线性关系,此时的线性回归方程为: F=145.05 lgC+2253.1(F为荧光强度,C为p53基因浓度,R=0.9988)。该方法能够测得的p53基因的检测限是3.0 fM,通过该方法检测出的p53基因检测限低,对于微量p53基因的检测具有重要意义。该方法具有操作简单、效率高、灵敏度高、费用低等优点。
其他文献
采用环氧氯丙烷活化壳聚糖交联树脂,并偶联抗-乙型肝炎表面抗原单克隆抗体,制备免疫吸附剂.紫外光谱测定抗体的偶联率为17.4%,对含乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的阳性血清的吸附
该工作用硝酸铝和碳酸氢为原料,通过液相沉淀制备了粒径小(一次粒径
阿齐霉素是新一代大环内酯类抗生素药物.目前已经广泛应用治疗呼吸感染疾病、性传播疾病、皮肤、软组织感染等疾病,预计将成为今后抗生素市场的主导药物之一.阿剂霉素由红霉
1、通过研究聚阴离子对导电聚合物聚合的影响,首次制备并发现了吡咯可以形成具有规整柱状形态的聚吡咯,提出了形成柱状聚吡咯的机理;2、在聚阴离子存在下,随制备条件的不同,
随着功能性配合物的合成以及生物无机化学的发展,桥联异多核配合物的合成已成为一个热门课题.该文以合吡啶环的N-取代草酰胺及三乙四胺六乙酸(TTHA)为桥配配体,合成了58个新
该论文分为以下两部分:(Ⅰ)金属卟啉催化下电原产生的超氧负离子参与的有机合成反应的研究;(Ⅱ)含有机多酸配体的手性钼硫簇合物的合成及表征.Ⅰ.在第一部分的工作中,主要进
A、在液晶聚氨酯的合成与表征上,一方面设计合成了三种主链型液晶聚氨酯扩链剂,另一方面设计合成了含液晶结构单元的新型侧链聚氨酯扩链剂.对-(对烷氧基苯甲酰氧基)苯甲酸0(