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抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs)是生物体内天然免疫系统中的重要组成部分,通常由12～45个氨基酸组成,因为其富含精氨酸和赖氨酸残基,所以主要以阳离子形式存在。目前大量不同类型的抗菌肽已从各种生物包括细菌、真菌、植物、昆虫、两栖类动物、鱼类、鸟类、哺乳类动物和人体中分离出来,并得到鉴定。多数抗菌肽都具有广谱抗菌作用,它们对革兰氏阳性菌、阴性菌和真菌都有杀灭作用,而且有效作用浓度极低,有些甚至在pM浓度下就可完全抑制细菌的生长。与传统抗生素相比,抗菌肽最大的优点在于它们作用迅速,且不易产生耐药性。
防御素是抗菌肽家族中最大的亚家族,是一类重要的内源性抗菌肽,具有稳定的分子结构和众多生物活性,是生物体天然免疫的重要组成部分。依据空间结构的不同,防御素可分为3大类:α-防御素、β-防御素和θ-防御素。其中在动物科学领域中,β-防御素有较好的研究价值,不易产生抗药性和毒性,因而受到广泛关注,成为近年来国内外研究热点。
人源β-防御素-6在国内外还没有研究报道,本论文通过基因工程手段构建了重组人源β-防御素-6(hDefb6)表达质粒pET-32aq(+)-hDefb6,利用pET原核表达系统使hDefb6在大肠杆菌中得到成功表达。通过镍离子亲和层析、甲酸化学切割、SephadexG-50凝胶层析和RP-HPDC等分离纯化手段得到了纯度较高的hDefb6.抑菌活性检测结果显示:hDefb6抑制革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia cili,ATCC25922)和真菌白色念珠茵(Candida aicans,ATCC2002)生长的最小浓度分别为37μg·mL-1和50μg·mL-1。当laDefb6的浓度为200μg·mL-1时尚未检测出其对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,ATCC2592)的生长有抑制作用。