【摘 要】
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双尾-C基因（Bicaudal-C)首先在果蝇(Drosophila melanogaster)中被发现,其功能丧失导致果蝇胚胎滤泡细胞的错误迁移、头部的缺失和双尾结构的形成。多个物种都含有该基因的同
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双尾-C基因（Bicaudal-C)首先在果蝇(Drosophila melanogaster)中被发现,其功能丧失导致果蝇胚胎滤泡细胞的错误迁移、头部的缺失和双尾结构的形成。多个物种都含有该基因的同源基因,其中小鼠同源基因Biccl的缺失导致小鼠产生与人类多囊肾疾病高度相似的症状,但其具体功能还未知。
克隆小鼠Biccl基因(GeneID：83675)是研究其基因产物功能的基础,本研究以小鼠肾脏组织总RNA为模板体外反转录为cDNA,通过分段巢式PCR及酶切连接的方法获得了全长约3Kb、无突变的小鼠Biccl cDNA序列,并成功构建其真核表达载体pCMV-Tag 4A-Biccl。
根据生物信息学分析结果,选择两个免疫原性较好的蛋白区段61E-199A和711Q-858D作为抗原,PCR扩增相应的小鼠BicclcDNA编码片段,并成功构建其原核表达载体；IPTG诱导表达,回收并纯化融合蛋白GST-Biccl-N-His6和GST-Biccl-N-His6,制备两种兔抗Biccl蛋白多克隆抗体。
Western blot证实这两种抗体具有高度特异性,并用细胞免疫荧光方法及免疫组织化学方法初步分析了该蛋白主要定位于鼠肾细胞的细胞质内,为进一步研究Biccl基因产物的生物功能奠定了良好基础。
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