【摘 要】
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目的: 在前期肺俞组（肺俞、大椎、风门）和肝俞组（肝俞、筋缩、胆俞）针刺治疗哮喘临床疗效分析基础上，本研究对两组患者治疗前后外周血基因组DNA甲基化程度及模式进行分析，从表观
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目的: 在前期肺俞组（肺俞、大椎、风门）和肝俞组（肝俞、筋缩、胆俞）针刺治疗哮喘临床疗效分析基础上，本研究对两组患者治疗前后外周血基因组DNA甲基化程度及模式进行分析，从表观遗传学层面研究针刺抗哮喘穴位的相对特异性及其分子生物学基础，为临床针刺治疗哮喘选穴提供科学依据。 方法: 依据哮喘控制测试(Asthma Control Test)评分选取肺俞组有效与无效病例和肝俞组有效与无效病例，提取患者治疗前后外周血中的基因组DNA样品，使用Illumina850K甲基化芯片对DNA甲基化水平进行研究。聚类分析各组差异甲基化位点分布并进行比较;使用DAVID、WebGestalt等生物学信息分析软件对甲基化调控基因参与生物学过程以及主要细胞信号通路进行分析，并使用R软件对位点与临床指征之间进行相关性分析。 结果: 1肺俞组与肝俞组两组穴位针刺治疗哮喘均能够提高ACT得分，明显改善生命质量，但组间比较无统计学差异。 2提取的DNA样品浓度为13.33±4.633ng/μl，OD值A260/A280为2.03±0.115，琼脂糖结果显示样品无降解，质量合格，符合下游芯片实验要求。 3肺俞有效组对患者甲基化水平的调节模式是使之趋于平衡状态，肺俞无效组使患者甲基化水平明显升高。肝俞有效组和无效组患者治疗后甲基化水平均明显提高。 4肺俞组甲基化调控基因参与了RNA聚合酶Ⅱ介导mRNA转录的负向调控、蛋白质泛素化以及蛋白质磷酸化等生物学过程，直接影响了相关蛋白质的表达及生物学功能，其参与通路主要有cAMP（环磷酸腺苷）信号通路、细胞粘附分子信号通路(CAMs)等，通过活化cAMP依赖的PKA使下游靶蛋白磷酸化，以及细胞粘附分子进行细胞间信息传递，影响细胞代谢和细胞行为，使细胞快速应答胞外信号，因此肺俞组在临床治疗具有快速起效的特点。 5肝俞组甲基化调控基因参与了淋巴细胞活化的生物学过程，调节了免疫细胞分化，其参与通路主要有T细胞受体信号通路、B细胞受体信号通路等，调节获得性免疫维持免疫应答的平衡，临床治疗相对于肺俞组起效较慢，但具有一定的长期疗效。 6临床指征与DNA甲基化差异位点关联性分析进一步证明肺俞组与肝俞组对于哮喘的调控机制不同。肺俞组主要调控了蛋白质修饰，其指征性基因PLEKHA2能够将外界刺激信号传入细胞内部，抑制炎症反应，直接提高患者的ACT得分;肝俞组指征性基因为PIP4K2A和TMEM55B，二者均通过调节免疫细胞分化、运动来达到抑制哮喘的作用。 结论: 1肺俞组与肝俞组均能够明显控制哮喘发作，但两穴位组临床疗效比较无明显差异，而在DNA甲基化层面两穴位组有区别。 2肺俞组与肝俞组起效机制不同:肺俞组通过对胞外信号的快速应答影响细胞代谢和细胞行为，快速缓解哮喘症状;而肝俞组主要靠调节获得性免疫维持免疫应答平衡改善哮喘症状，在分子生物层面体现了两组穴位的相对特异性。 3 DNA甲基化差异位点与临床指征之间存在一定的关联性，可能是针刺穴位相对特异性的分子生物学基础。
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