局部滴用防腐剂建立兔干眼症动物模型的稳定性研究

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目的:   长期观察局部滴加洁尔灭建制作兔干眼症动物模型的稳定性。   方法:   新西兰白兔40只随机分为4组,两只眼睛均做为实验眼,分别滴加0.1%洁尔灭2周(BAK-W2组)、3周(BAK-W3组)、4周(BAK-W4组)、5周(BAK-W5组),于处理前(normal)及处理后day0、day7、day14、day21进行泪液分泌实验、荧光素钠染色、结膜印迹细胞学检测,免疫荧光染色和结膜糖原染色法检测MUC5AC在结膜的表达量,光镜下观察角膜、结膜的组织学改变,其中处理前(normal)及处理后day0、day7、day21加做角膜、结膜电镜超微结构观察。采用SPSS11.0软件对各项实验指标进行统计学分析。各实验组处理前正常状态下Schirmer试验滤纸湿长及杯状细胞计数差异采用one way ANOVA(Bonferroni);FL染色评分差异采用Kruskal-Wallistest。各实验组处理前后各时间点Schirmer试验滤纸湿长及杯状细胞计数差异采用one way ANOVA(Bonferroni),各时间点FL染色评分差异采用Wilcoxon rank test(Bonferroni).所有检验均为two-tailed,设p<0.05为有统计学差异。   结果:   与洁尔灭处理前相比,泪液分泌湿长值统计分析结果示,BAK-W2在day0,BAK-W3组与BAK-W4组在day0、day7,BAK-W5组在day0、day7、day14、day21时,差异仍有显著性(P<0.001,P<0.05,P<0.05,P<0.05);荧光素钠染色评分统计分析结果示,各实验组在day0、day7、day14时,差异均有显著性(P<0.01,P<0.001,P<0.001,P<0.01);角膜上皮光学显微镜检测示各实验组在day0、day7时角膜上皮变薄、细胞排列紊乱;结膜印迹细胞学检查中杯状细胞计数统计分析示,实验组BAK-W2组在day0、day7、day14,其他三个实验组在各时间点差异均有显著性(P<0.001),其中实验组BAK-W5可以稳定维持结膜杯状细胞低分泌的状态;结膜PAS染色及结膜MUC5AC免疫荧光检测结果与结膜印迹细胞学检测结膜相吻合;角膜与结膜的电镜检测结果显示实验组BAK-W2、BAK-W3的显著性差异可以维持到day7,BAK-W4、BAK-W5可以维持到day21,其中以5周组的差异最为明显。   结论:   1.在兔眼表局部滴加0.1%的洁尔灭2周、3周、4周建立的兔干眼症动物模型停止洁尔灭处理后随着观察时间的延长,干眼症的体征在逐渐恢复。   2.在兔眼表局部滴加0.1%的洁尔灭5周可以建立稳定的干眼症动物模型,这种模型的特征性变化至少可以维持2周以上的时间,其中结膜杯状细胞受损低分泌的状态可以维持至少3周的时间。
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