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非霍奇金淋巴瘤(non–Hodgkin’s lymphoma,NHL)主要包括T和B/NK细胞淋巴瘤,其临床特征不尽相同,生物学性状和临床表现主要由发生基因突变的肿瘤细胞相关因子决定,目前许多研究者指出肿瘤免疫微环境与淋巴瘤的预后有密切联系。肿瘤间质包含多种细胞,包括肿瘤细胞和免疫细胞,如淋巴细胞,树突状细胞,自然杀伤细胞,巨噬细胞等[1]。研究表明:巨噬细胞含量的高低与淋巴瘤患者生存时间成负相关。含有较高量巨噬细胞(>50/hpf)的患者2年总生存期为22.2%,而含有较少量巨噬细胞(<50/hpf)的病人总生存期为52.8%[2]。淋巴瘤中促进瘤细胞生长的巨噬细胞称为淋巴瘤相关巨噬细胞即(lymphoma-associated macrophage,LAM)。LAM分泌趋化因子17(C-C motif chemokine ligand 17,CCL17)、CCL22、CCL24、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等细胞因子,通过因子与瘤细胞的的间接作用及LAM与瘤细胞的直接作用,促肿瘤的生长和转移。在淋巴瘤患者的外周血中单个核细胞具有向LAM方向转化的潜能,能促进瘤细胞的生长[3]。LAM在骨髓中会不会也能促进肿瘤生长?Cheng[4]等发现组蛋白去乙酰化酶11(histone deacetylase 11,HDAC11)含去乙酰化酶保守区域,通过结合IL-10基因的启动区域调节抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)中IL-10转录和表达,降低巨噬细胞的抗原递呈功能,使T细胞“无能”,发挥肿瘤的逃逸。对慢性骨髓增殖性肿瘤(chronic myeloproliferative neoplasms,CMPN)的全血进行基因检测发现:患者体内的HDAC11高表达[5]。在淋巴细胞白血病中发现:HDAC11与不良预后密切相关[6]。那么NHL中肿瘤细胞的生长会不会与HDAC11有关?其变化跟巨噬细胞有什么样的关系?随着疾病的进展M2中HDAC11表达会有怎样的变化?本研究通过检测不同阶段NHL患者骨髓中M2含量及分泌的CCL22,了解LAM的数量和临床意义;通过检测M2中HDAC11的表达,探讨HDAC11在NHL发病机制中所起的作用。第一部分 NHL患者骨髓LAM数量及分泌的促肿瘤因子的研究目的:检测NHL患者骨髓中M2(CD14~+CD68~+CD163~+)含量和M2与M1(CD14~+CD64~+CD80~+)比例以及CCL22m RNA相对表达水平,分析M2含量与CCL22m RNA及临床指标的相关性,了解LAM的数量及临床意义。方法:选取2015年7月-2016年5月在天津医科大学总医院血液科住院的NHL患者44例,初治与疾病进展(progressive disease,PD)17例,有效(包括完全缓解(complete remission,CR)和部分缓解(partial remission,PR))和疾病稳定(stable disease,SD)27例,其中弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)29例、滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma,FL)5例、外周T细胞淋巴瘤(peripheral T cell lymphoma,PTCL)5例、小B细胞淋巴瘤(small B cell lymphoma,SBCL)4例、伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma,BL)1例,Ann Arbor分期Ⅰ~Ⅲ期37例,Ⅳ期7例(均为骨髓浸润者),B症状9例,国际预后指数(International Prognostic Index,IPI)评分0~1分30例,≥2分14例,健康对照18例。流式细胞仪(FCM)测骨髓中M2含量及M2与M1比例;实时定量PCR(RT-PCR)测CCL22 m RNA表达。结果:1.初治和疾病进展组NHL患者M2含量[(15.25±1.97)%]高于有效和疾病稳定[(8.11±1.22)%,P=0.04]及健康对照组[(4.53±0.83)%,P=0.0001],有效和疾病稳定组高于健康对照组(P=0.002)。初治和疾病进展组NHL患者M2/M1比例[(1.04±0.12)%]高于有效和疾病稳定组[(0.61±0.06)%,P=0.001]及健康对照组[(0.60±0.07)%,P=0.003]。2.T细胞NHL患者M2含量[(14.33±1.64)%]高于B细胞NHL患者组[(10.32±1.32)%,P=0.25],无统计学差异。3.Ⅳ期NHL患者M2含量[(16.09±1.57)%]高于Ⅰ~Ⅲ期NHL患者[(9.88±1.31)%,P=0.04,有统计学意义。4.有B症状NHL患者M2含量[(15.43±1.52)%]高于不伴有B症状NHL患者[(9.69±1.37)%,P=0.04],有统计学差异。5.IPI评分≥2分组NHL患者M2含量[(14.58±2.34)%]高于0~1分组[(9.13±1.24,P=0.03],有统计学差异。6.患者A(FL IIIA期)化疗前M2含量为25.93%,2疗程标准RCHOP治疗后患者均处于疾病稳定阶段,患者M2含量在第1和2个疗程结束后分别为7.72%和0.78%,明显下降;患者B(DLBCL IIIB期)化疗前M2含量为23.08%,2疗程RCHOP治疗后均处于部分缓解阶段,患者M2含量在第1和2个疗程结束后分别为4.87%和1.54%,明显下降;患者C(DLBCL IIIA期)6疗程RCHOP及2疗程R后处于完全缓解阶段时M2含量分别为2.57%、2.13%,当疾病进展时M2含量为17.78%。7.初治和复发组NHL患者CCL22含量[(7.03±1.45)%]高于有效和疾病稳定组[(3.59±0.70)%,P=0.02]及健康对照组[(2.12±0.76)%,P=0.005],后两组无统计学差异。8.NHL患者骨髓中M2含量与LDH、β2-MG、CCL22均呈正相关(r=0.49,r=0.44,r=0.33;P=0.001,P=0.02,P=0.04)。结论:NHL患者骨髓中LAM数量与疾病疗效及全身状态有关,而与NHL类型无关,随着病情好转,LAM及CCL22下降,LAM在一定程度上能代表肿瘤的负荷。第二部分 HDAC11在NHL患者M2中蛋白表达水平的研究目的:通过检测NHL患者M2中HDAC11蛋白的表达,探究HDAC11与LAM的关系。方法:选取2015年7月-2016年5月在天津医科大学总医院血液科住院的NHL患者44例,初治与疾病进展17例,有效和疾病稳定27例,健康对照18例。细胞因子刺激外周血单核细胞分化为M2,应用western blot检测不同疗效水平M2中HDAC11的表达水平。结果:NHL患者HDAC11蛋白表达水平高于对照组,当疾病进展时,M2中HDAC11表达水平上升。结论:在NHL患者中HDAC11可能是LAM促肿瘤生长的内部因素,随着疾病的进展,其含量上升,推测可能是HDAC11通过降低M1抗原提成作用和提高M2分泌促肿瘤生长因子作用,从而引起免疫耐受,抑制细胞凋亡。