CTCF维持基因组稳定性研究HSV-1基因组复制过程中的动态变化研究

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CTCF通过保护脆性位点完整性维持基因组稳定性。维持基因组稳定性和传递完整的基因组对细胞、器官乃至一个物种的生存都至关重要,但是,基因组中本身就存在一种被称为常见脆性位点(CFSs)的座位,该位点常引起特定基因的缺失、异位或染色体重排。大多数的CFSs都能够响应阿非迪霉素(APH)的诱导。利用免疫荧光(IF)、流式细胞术(FCM)、实时定量反转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白印记(WB)等技术进行分析,发现敲低CTCF引起细胞CFSs断裂频率上升、基因组不稳定性加剧、γH2AX和53BP1富集增加、细胞周期停滞和DNA修复相关蛋白表达水平变化。经APH处理并采用免疫荧光-荧光原位杂交(IF-FISH)和免疫共沉淀定量聚合酶链式反应(ChIP-qPCR)技术检测,发现CTCF能够在53BP1所标记的CFSs,或已知的CFSs处富集,说明CTCF可以通过保护CFSs来维持基因组稳定性。  通过STED超分辨显微镜观察复制中的HSV-1基因组。人类Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)是一种重要的、以人类为宿主而且广泛存在的病原体。为了深入研究HSV-1的复制过程,将荧光原位杂交、免疫荧光与受激发射损耗显微技术(STED)相结合对复制中的病毒基因组和相关蛋白进行观察。利用定位于HSV-1基因组相同区域但以不同标记物标记的探针进行原位杂交,无论是前复制期还是复制后期,探针间的相关性和共定位频率都较高;而以定位于HSV-1基因组不同区域并以不同标记物标记的探针进行杂交时,探针间的平均距离随着病毒复制的进行而不断增大,说明,随着HSV-1进入复制阶段,其基因组逐渐从压缩状态转变为松散状态。HSV-1单链结合蛋白ICP8与病毒基因组间的平均距离比其与RNA复制酶Ⅱ(RNA PolⅡ)间的距离小,说明,虽然HSV-1的转录和复制都在病毒复制区内进行,但是这两个生物学过程被分隔在不同亚结构内。HSV-1裂解感染是一个动态变化的过程,而STED显微镜能够被用于研究病毒的复制过程。
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