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目的:抗青光眼术后手术失败的主要原因是术后滤过泡瘢痕化，即结膜下组织----Tenons囊成纤维细胞（human tenons fibroblasts，HTF）大量增殖及分泌大量的细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，促进滤过道瘢痕的形成。本实验旨在研究转化生长因子β3（transforming growth factor beta3，TGFβ3）对HTF增殖及ECM的影响。 方法:运用组织块培养法进行原代培养HTF。采用RT-PCR及免疫荧光分别从基因及蛋白水平鉴定所培养的细胞为成纤维细胞。选取P3细胞作为研究对象。以TGFβ3刺激HTF作为实验研究对象，比较不同刺激浓度:0ng/ml、0.1 ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、50ng/mlTGFβ3刺激HTF细胞增殖情况。以TGFβ2刺激HTF作为阳性对照，比较不同浓度0ng/ml、1ng/ml、10ng/ml、50ng/ml，不同时间1天、2天、3天直到7天刺激HTF细胞增殖情况，找到最佳刺激浓度及最佳刺激时间用于实验研究。将实验分为三组，未刺激组（no treated）、阳性对照(TGFβ2刺激组)及实验组(TGFβ3刺激组），比较三组不同刺激HTF后，细胞增殖情况，计算TGFβ3刺激后的细胞生长抑制率。三组不同刺激组分别同时作用于HTF，分别提取三组HTF的总RNA，RT-PCR定性、Real-time PCR定量检测HTF细胞外基质中纤维连接蛋白（fibronectin，FN）、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)及胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)基因水平，比较三组之间的基因表达的不同。同时，运用免疫组织化学染色检测三组HTF细胞外基质中FN、collagenⅠ及collagenⅣ的蛋白表达水平的差异 结果: 1.组织块贴壁后，第7天可见组织块周边贴壁爬出长梭形细胞，形态符合HTF的细胞形态特征。第2周可见组织块周围爬满长梭形细胞，传至第3代，可见细胞形态及生长速度稳定（图1）。 2.RT-PCR结果显示细胞中FN、兔抗人波形蛋白(Vmentin)基因水平表达阳性（图2）。细胞免疫荧光鉴定结果显示:兔抗人波形蛋白(Vimentin)抗体染色阳性。因此，由人眼Tenons囊组织块原代培养出的细胞属成纤维细胞（图3）。 3.10ng/mlTGFβ3刺激HTF后，细胞增殖明显受抑制，且具有统计学意义(P=0.0023166，P＜0.05)，因此，选取10ng/ml作为TGFβ3的最佳刺激浓度(图6)。 4.1ng/mlTGFβ2刺激HTF后，细胞增殖明显增加，且具有统计学意义(P=0.0034119，P＜0.05)，因此选取1ng/ml作为TGFβ2的最佳刺激浓度（图4）。以1ng/ml TGFβ2刺激HTF，可看到前6天细胞数量均明显增加，直至第7天HTF生长开始下降，且在第1天时细胞大量生长，与未刺激时相比具有统计学意义（图5）。因此，选取1天作为刺激时间即可比较出细胞增殖变化。 5.1ng/ml TGFβ2刺激组与无刺激组相比，细胞明显增殖，具有统计学意义(P=0.0071722，P＜0.05)。10ng/ml TGFβ3刺激组与无刺激组相比，细胞增殖明显下降，具有统计学意义(P=0.0157，P＜0.05)。由此可见，TGFβ2与TGFβ3在HTF增殖方面影响明显，且可选取该浓度作为实验浓度（图7）。另外，TGFβ3刺激HTF后，细胞的生长抑制率为17.86％。 6.RT-PCR定性比较三组不同刺激HTF后的结果:10 ng/ml TGFβ3刺激组ECM中FN、collagenⅠ及collagenⅣα3、Ⅳα4、Ⅳα5、Ⅳα6基因表达水平降低，而collagenⅣα1、Ⅳα2的基因表达水平无明显变化（图8）。从Real-time PCR定量比较来看，结果与RT-PCR检测结果一致，10 ng/ml TGFβ3刺激组ECM中FN、collagenⅠ及collagenⅣα3、Ⅳα4、Ⅳα5、Ⅳα6基因表达水平降低，而collagenⅣα1、α2的基因表达水平无明显变化，且具有统计学意义(P值分别为0.0471、0.0007117、0.0087652、0.0043483、0.0028456、0.0145,P值均＜0.05)(图9)。 7.免疫组织化学从蛋白水平比较的结果显示:无刺激组、1 ng/ml TGFβ2刺激组（阳性对照）、10ng/ml TGFβ3刺激组（实验组）中FN、collagenⅠ及collagenⅣ均表达阳性，但TGFβ3刺激组中FN、collagenⅠ及collagenⅣ染色信号明显减弱，可看出蛋白水平下降（图10）。 结论:TGFβ3可抑制HTF增殖及ECM中成分的表达，推测TGFβ3可能在一定程度上起到抑制瘢痕形成的作用。