聚偏氟乙烯改性亲和膜及其吸附与免疫分离性能研究

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亲和膜分离技术是将亲和色谱和膜分离相结合的一种新型分离技术,既具膜的快速对流传质特征,又有生物分子的识别功能,能实现一步纯化获得高纯度生物物质的目的,从而简化纯化步骤,可减少产品损失,降低操作成本。聚偏氟乙烯(PVDF)耐高温、耐溶剂,并具有优良的化学稳定性,如能制得性能优良的中空纤维亲和膜,则将对亲和膜分离的工业放大与推广应用起到重要作用。 本论文首次利用PVDF中空纤维膜为基质材料,通过表面涂覆、接枝、共混等改性方法,有效地改善了PVDF膜表面的亲水性和生物相容性,并将特定的配基接枝到改性PVDF膜表面,制备成亲和膜,用于生化产品的分离纯化。具体内容如下: (1)将亲水性物质羟乙基纤维素(HEC)偶联到经强碱改性的PVDF中空纤维膜上,进一步分别接枝上L-苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和组氨酸(His),制得氨基酸亲和膜。用FT-IR和XPS分析其接枝效果,配基密度分别达到780.3、611.5、702.1μmol/g膜;将其用于从人血浆中分离纯化出有医用价值的丫-球蛋白,最适条件下,10m1人血浆可纯化出21mg γ-球蛋白,其纯度达83.9%,纯化倍数达6倍以上;经7次重复性使用,Phe亲和膜的吸附量仍没有明显降低,为人血浆中γ-球蛋白的分离纯化提供了一条简便、实用的新方法。 (2)PVDF中空纤维膜经强碱处理后,将亲水性物质聚乙烯醇(PVA)偶联到PVDF膜上,经戊二醛交联并键合壳聚糖,制得壳聚糖亲和膜。用FT-IR和XPS分析其膜表面改性效果;壳聚糖键合量达到0.154mg/cm2膜;将壳聚糖亲和膜用于水溶液中内毒素的去除,在pH7.0,离子强度0.2mol/1条件下,其饱和吸附量为21.421EU/mg膜,解离常数为0.500lEU/mi,流速为1ml/min时,内毒素去除率达到92.3%,去除效果良好;用于去除牛血清白蛋白BSA和溶菌酶溶液中内毒素时,在最适pH、离子强度条件下,其对内毒素去除率分别为88.6%(11.50 EU/mg膜)和72.4%(9.92 EU/mg膜),蛋白质回收率分别可达93.4%(0.187 mg/mg膜)和92.3%(0.104 mg/mg膜)。 (3)采用干法制膜制得了网络状大孔结构的硝酸纤维素(NC)和PVDF微孔膜。对于NC膜,以丙酮为溶剂,乙醇、异丙醇和水为非溶剂添加剂,通过调节制膜液中溶剂和非溶剂的配比以及成膜环境条件,首次制备了孔径可控的NC膜,为制备网络状孔径结构均一的大孔膜的发展提供了一种新方法;对于PVDF膜,则分别采用磷酸三乙酯(TEP)、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基乙酰胺(DMAc)为溶剂,乙醇、异丁醇、丙酮、醋酸甲酯和水为非溶剂添加剂,由于PVDF的高度结晶性,所制得的PVDF膜其孔径的变化幅度没有NC膜那样宽。 (4)采用聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)作增容剂(Compatibilizer),可有效促进PVDF和NC之间的共混相容性;通过调节制膜液中聚合物和溶剂配比、非溶剂添加剂种类以及成膜环境,制备出网络状结构的PVDF/NC共混膜。静态水接触角分析发现,随着制膜液中NC含量的增大,共混膜的亲水性逐渐得到提高。 (5)通过Western转印技术,将纯度为98%的重组别藻蓝蛋白(recombinant allophycocyanin,rAPC)分别转印到研制的NC、PVDF和PVDF/NC共混膜上,制备成rAPC免疫亲和膜,利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应,分别对兔抗APC多克隆抗血清进行分离纯化,获得的兔抗APC抗体的纯化吸附量分别为5.79、7.54和7.32 mg/g膜;经SDS-PAGE分析,其抗体纯度均高于98%,为抗体的亲和纯化提供了一种高效的免疫分离用膜。
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