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鸡传染性喉气管炎(infectious laryngotracheitis，ILT)是由疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科的喉气管炎病毒(infectious laryngotracheitis virus，ILTV)引起的鸡的一种高度传染性呼吸道疾病，病变主要在喉头和气管组织，特征为呼吸困难、咳嗽、气喘、咳出带血粘液。ILT传播快，死亡率高，是危害养鸡业的主要疾病之一。 目前实验室诊断ILTV主要用琼脂凝胶免疫沉淀法(AGID)、免疫荧光(FA)、血清中和试验(SN)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等，但这些方法都比较烦琐。本研究结合病原分离和动物回归试验，建立了简便、快速、准确检测和诊断ILTV的PCR方法，对有效控制该病的发生及传播具有重要意义。另外本研究小组还开发建立了一种更为快速灵敏特异的荧光定量PCR诊断方法。根据TK基因保守特性，在其高度保守位置设计一对特异的引物，扩增后回收克隆，重组质粒命名为TK wlg，利用它制作标准曲线，建立了绝对定量荧光PCR方法。经过特异性实验、重复性实验、敏感性实验验证，证明建立的方法具有特异、稳定、灵敏等优点。对30份病料进行检测发现，qPCR、PCR及病毒分离三种方法检出率分别是96.7％，83.3％和60％，证实了荧光定量PCR方法较常规PCR要灵敏，检出率要高，可以减少漏检。 目前一些顶级的生物公司开发出一系列高通量的测序仪，这些机器都要求测序样品到达较高的纯度。为了得到高纯度和高含量的ILTV DNA本研究小组对Volkening等的方案进行了改进和完善，并通过PCR等方法证实了该法能够得到较纯的病毒DNA，产物适用于限制性酶切片段长度分析(RFLA)，病毒DNA片度克隆和病毒基因组转录等下游实验。 为了研究ILTV分子流行病学实验研究做准备，本研究从30份病料中选取20份PCR检测为阳性的病料，进一步结合传统方法进行分离鉴定，成功分离鉴定出20株田间毒株。随后设计了TK、gD、gB、gM基因及ICP4部分基因扩增引物对ILT进行分子流行病学调查，测序结果显示发现TK、gD、gB、gM基因序列同源性在99.7％～100％之间，这些基因在历经4年变化不大，与分离地点关系不大。本研究借用前人的研究成果对分离毒株ICP4部分基因测序比较，发现本次分离的分离株中有一部分具有疫苗株特征分子标记，怀疑这些病例可能是由疫苗导致，但证实这一猜想还需要进一步实验验证。 为了解病毒在鸡只体内的分布规律，更好地防控ILT，本研究利用本小组建立的绝对定量荧光定量PCR、常规PCR及病毒分离等方法研究ILTV在鸡只喉头、气管、肺、脾脏、胰脏、心脏、胸腺、食道、法氏囊、肾脏、盲肠、肝脏和大脑等组织中的分布及其随时间在其嗜性器官中的拷贝数，本实验研究目的是定量多个组织中病毒量，了解病毒在实验鸡只中动力学分布。结果发现ILTV在多个组织中都有分布，但主要分布于喉头、气管、盲肠、肺、食道、胸腺、肾脏和胰脏8个组织中，其中盲肠中发现ILTV是首次报道。对该8个组织做病理切片得到一致的结果。 为找到一种更好的疫苗防控ILT，本实验采用鞭毛素作为佐剂，在根据前人研究成果基础上分别从剂量，免疫途径等做了一些初步研究，研究得到的数据对下一步实验的开展起到了很好的指导意义，证实添加鞭毛素能使灭活苗起到一定的保护效果。