抗热应激中药复方中挥发油的检测及安全性与部分药效的研究

• 作 者: 郭浩
• 机 构: 华南农业大学
• 出 处: 华南农业大学
• 发表日期: 2012年期
• 关键词: 中药复方 热应激 热休克蛋白 化学成分 挥发油

热应激状态下，畜禽会出现一系列的不良反应，如：生理机能紊乱，生产性能下降，严重时甚至会出现死亡。由于热应激给畜禽养殖业带来严重的经济损失，所以研究防治热应激的药物成为了当前的研究热点。根据文献报道现已发现多种药物可以增加机体的耐热力，促使热休克蛋白的表达，但是中药作为抗热应激的饲料添加剂抗热应激的报道较少。本研究分为三部分，第一部分是中药复方中挥发油成分的检测，第二部分是中药复方的安全性研究，第三部分是中药复方抗热应激药效的研究。　　复方中挥发油的检测试验采用气相色谱法检测。根据中兽医药的组方原则，确定复方1的君药为香薷，复方2的君药为紫苏，复方3的君药为藿香。采用超声提取法提取香薷、紫苏和藿香中的挥发油成分，并分别检测其中麝香草酚、紫苏醛和甲基胡椒酚的含量。安全性试验与药效试验均选用6-7周龄的昆明种小白鼠为实验动物。采用急性毒性试验对三组中药复方的安全性进行研究，用半数致死量和最大耐受量对三种复方中药的安全性进行评价。药效研究主要针对HSP70和HSF在小鼠肝脏中的含量，用ELISA试剂盒进行定量检测。　　通过气相色谱法(GC)分别对复方中麝香草酚、紫苏醛和甲基胡椒酚含量的检测，确定了三种挥发油的的最佳色谱条件。精密度试和验稳定性试验结果表明：3种色谱条件均具有较好的精密度，各检测成分在8小时均比较稳定。　　通过对100只小鼠分组进行急性毒性试验发现：三组中药复方的半数致死量无法测得，然后对三组复方的最大耐受量进行检测，测得三种复方的最大耐受浓度分别为72g/kg、72g/kg、64g/kg。在灌胃7天后采样，HE染色后观察其心脏、肺脏、肝脏和肾脏的组织结构和形态，发现心脏、肝脏和肾脏并无损伤。肺脏肺泡有不同程度的融合。　　药效试验将120只小鼠，随机分为12组，第1-3组灌胃复方1的水煎液0.8mL，第4-6组灌胃复方2的水煎液0.8mL，第7-9组灌胃复方3的水煎液0.8mL，第10-12组为对照组，灌胃生理盐水0.8mL。所有小鼠放入40℃恒温箱中，进行热应激处理。最后断颈处死小鼠，采集小鼠肝脏，用ELISA试剂盒检测HSP70和HSF的含量。　　HSP70检测结果显示：用药各组的HSP70在未接受热应激时便已经高于对照组，随着热应激的持续，小鼠肝脏中HSP70的表达量呈现明显的上升趋势且各用药组小鼠肝脏HSP70表达量仍然均高于常温对照组，高温1小时后复方1组小鼠肝脏的HSP70最高，高温3小时后复方3组小鼠肝脏的HSP70含量最高。　　HSF检测结果显示：在非热应激状态下，各组小鼠肝脏中的HSF含量均较高，其中灌胃生理盐水组的HSF含量最高，随着热应激的持续，小鼠肝脏中的HSF随着热应激时间的延长而减少，其中热应激1小时后复方1组小鼠肝脏的HSF下降最多，热应激3小时后复方3组小鼠肝脏HSF含量下降最多。