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目的:利用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制宫颈癌SiHa细胞中血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。
方法:设计针对VEGF的两种短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA),分别构建PGPU6/GFP/Neo-VEGF重组质粒表达载体,命名为pV1、pV2。利用脂质体将质粒转染入人宫颈癌SiHa细胞,荧光纤维镜下观察其转染效率。采用RT-PCR方法检测SiHa细胞中VEGF mRNA的变化情况。筛选出抑制率较高的质粒进行下一步实验;转染48小时后,用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。
结果:构建的质粒成功转入SiHa细胞内,转染率约80%。RT-PCR结果显示pV1、pV2对VEGF mRNA均有显著的抑制作用,与阴性对照组、空白对照组比较差异显著(P<0.01和P<0.05),其中pV1抑制率高达(82.17%±4.45%);用该质粒转染后,流式细胞术结果显示细胞凋亡率较空白对照组及阴性对照组均明显升高(P<0.01)。
结论:RNA干扰技术可以有效沉默人宫颈癌SiHa细胞株中VEGF mRNA的表达,并可诱导肿瘤细胞凋亡。为下一步实体瘤实验奠定了基础,并提示该技术可能成为临床治疗宫颈癌的有效辅助手段。