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目的：研究我院临床分离的产质粒介导AmpC酶的大肠埃希和肺炎克雷伯菌ampD基因多态性，预测并验证ampD基因的启动子所在位置，研究ampD全基因的结构特点。
方法：以我院临床分离的产质粒介导AmpC酶的6株大肠埃希菌和14株肺炎克雷伯菌为研究对象，利用常规纸片扩散法药敏试验确定AmpC酶的诱导性及对各抗生素的耐药性；琼脂稀释法检测实验菌株对头孢西丁耐药的最小抑菌浓度(MIC)；PCR技术扩增染色体ampD结构基因，与pGEM-T easy载体连接，构建重组载体pT-ampD并测序；利用Softberry FGENESH软件预测ampD基因的启动子位置，设计特异性引物扩增ampD启动子序列，测序，并与pKK232-8启动子探针质粒连接构建重组载体pK-ampDP，转化至E.coli DH5a中，在含氨苄青霉素和氯霉素双抗性平板上进行筛选；PCR技术扩增ampD全基因序列并测序。
结果：药敏实验结果显示实验菌株对头孢西丁、头孢唑啉耐药率最高，达到100％和95％，对亚胺培南的敏感性最高，无耐药菌产生。诱导实验及头孢西丁MIC值检测结果显示4株DHA-1型大肠埃希菌诱导阳性，头孢西丁的MIC值较低，2株CMY-2型的MIC值偏高，达到1024ug/ml；14株DHA-1型肺炎克雷伯菌除K17、K18和K22诱导阴性，其余菌株阳性，其中K4、K13、K14和K17的MIC值较高，达到512ug/ml。ampD结构基因检测结果显示，6株大肠埃希菌中，4株DHA-1型有3处相同的核苷酸突变，均为沉默突变；2株CMY-2型在发生相同的氨基酸改变Ala-176-Val，其中1株还在143和149位发生氨基酸改变Arg-143-Cys、Asn-149-Lys；14株DHA-1型肺炎克雷伯菌中，6株菌有一个相同的氨基酸改变Leu-143-Ile，1株菌发生2处氨基酸改变，分别为Asn-4-Tyr和Gly-6-Val，1株ampD阴性，其余菌株无突变。预测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌ampD启动子序列，构建pK-ampDP重组质粒，序列分析无基因突变。ampD全基因序列包括ampD结构基因、ampD启动子以及两者之间的核苷酸序列，测序结果分析结构基因和启动子之间的核苷酸序列无突变。
结论：我院分离的产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对头孢西丁、头孢唑啉高度耐药，对亚胺培南高度敏感，无超级耐药菌产生。我院分离的产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌中，CMY-2型AmpC酶的产生可能与ampD突变有关，DHA-1型AmpC酶的产生与ampD突变无关；我院分离的DHA-1型产质粒介导AmpC酶的部分肺炎克雷伯菌ampD结构基因在C’端发生突变，该突变与AmpC酶的表达无关；产质粒介导AmpC酶的大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的ampD基因具有基因多态性的特点。