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目的：观察二苯乙烯苷和淫羊藿苷对α-syn转基因PC12细胞和COS-7细胞过表达α-synuclein是否有直接影响及其它们的作用机制。
材料与方法：培养α-synuclein转基因PC12细胞和COS-7细胞。应用MTT法和乳酸脱氢酶漏出率检测二苯乙烯苷和淫羊藿苷的无毒范围。RT-PCR法检测培养细胞α-synuclein mRNA表达，Western Blot法检测α-syn、UCH-L1和Parkin蛋白表达，免疫细胞化学法检测α-syn蛋白表达，免疫荧光双标和激光共聚焦显微镜法检测α-syn与淀粉样纤维的共表达。
结果：
(1)二苯乙烯苷对α-syn转基因PC12细胞的影响。不同剂量二苯乙烯苷与α-syn转基因PC12细胞共孵育24小时，利用MTT法和乳酸脱氢酶漏出率确定PC12细胞培养中二苯乙烯苷的无毒范围为6.25～200 μmol/L。应用RT-PCR法检测不同剂量二苯乙烯苷对α-syn转基因细胞α-synuclein mRNA表达的改变。结果表明6.25～100 μmol/L二苯乙烯苷与模型对照相比，α-synuclein mRNA表达均降低(P<0.05)。免疫印迹法结果显示：模型与对照组相比，二苯乙烯苷各剂量组α-syn条带面积明显变小，灰度减低，α-syn蛋白多聚体和单体表达均下降(P<0.05)。免疫荧光双标记和激光共聚焦显微镜观察，发现二苯乙烯苷处理后表达α-syn的红色荧光降低，表达淀粉样物质的绿色荧光也相应下降。表明二苯乙烯苷可以减少PC12细胞内α-syn的含量和淀粉样物质的形成。免疫印迹法检测泛素-蛋白酶体系统的Parkin和UCH-L1蛋白，显示二苯乙烯苷各剂量组Parkin、UCH-L1蛋白表达增多，提示二苯乙烯苷可能通过增多Parkin、UCH-L1蛋白而促进α-syn的降解。
(2)二苯乙烯苷对α-syn转基因COS-7细胞的影响。不同剂量的二苯乙烯苷与α-syn转基因COS-7细胞共孵育24小时，利用MTT法检测COS-7细胞二苯乙烯苷的无毒性范围是12.5～200μmol/L。免疫组化法结果显示，在光镜下转基因模型组COS-7细胞胞体较大，呈多形性生长，胞内有大量包涵体。与模型对照组相比，二苯乙烯苷(12.5、25、50、100、200μmol/L)使细胞胞浆中α-syn蛋白免疫阳性减弱，着色减轻。利用免疫印迹法检测α-syn蛋白表达，发现与转基因模型对照组比较，二苯乙烯苷各剂量组(12.5、25、50、100、200μmol/L)α-syn条带面积明显变小，灰度减低，显示α-syn的表达及聚集减少。对三次试验做统计学分析，显示二苯乙烯苷100μmol/L和200μmol/L组的α-syn表达与模型对照组比较有显著降低(P<0.05)。
(3)淫羊藿苷对α-syn转基因PC12细胞的影响。应用RT-PCR法检测不同剂量淫羊藿苷对α-syn转基因细胞α-synuclein mRNA表达的改变。结果表明5.26～84.24μmol/L淫羊藿苷与模型对照相比，α-synuclein mRNA表达均降低。对三次试验做统计学分析，显示淫羊藿苷84.24μmol/L组的α-synuclein mRNA表达与模型对照组比较有显著降低(P<0.05)。免疫印迹法结果显示：模型与对照组相比，淫羊藿苷各剂量组α-syn条带面积明显变小，灰度减低，α-syn蛋白多聚体和单体表达均下降。对三次试验做统计学分析，显示淫羊藿苷42.12和84.24μmol/L组的α-syn表达与模型对照组比较有显著降低(P<0.05)。免疫印迹法检测泛素-蛋白酶体系统的Parkin和UCH-L1蛋白，显示淫羊藿苷各剂量组Parkin、UCH-L1蛋白表达增多，提示淫羊藿苷可能通过增多Parkin、UCH-L1蛋白而促进α-syn的降解。
结论：二苯乙烯苷和淫羊藿苷在体外实验中能够抑制α-syn转基因细胞α-syn过表达，其机制可能为抑制α-synuclein mRNA表达(来源减少)和增强泛素-蛋白酶体系统Parkin和UCH-L1蛋白表达(降解增多)。