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由水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae，简称Xoo)引起的水稻白叶枯病是威胁世界水稻安全生产的重要细菌病害之一，尤其在亚太平洋地区以及非洲的许多国家的水稻主产区发生严重。Xoo既是一种重要的植物病原菌，又是研究与植物互作分子机制的模式细菌之一。环二鸟苷磷酸(c-di-GMP)信号途径参与调控了Xoo毒性的表达。在c-di-GMP信号途径的调控下，Xoo可利用多种毒性因子调控在水稻上的致病性。具有GGDEF结构域的鸟苷酸环化酶(DGC)合成c-di-GMP，而具有EAL/HD-GYP结构域的磷酸二酯酶(PDE)降解c-di-GMP。 Filp(PXO_00403)是一个FimX同源蛋白，具有退化的EAL-GGDEF结构域，不行使DGC和PDE酶活性，但可作为c-di-GMP的信号受体。Filp可特异性地与退化的PilZ结构域蛋白PXO_02715发生蛋白互作，从而调控了Xoo的毒性。前期研究采用isobaric quantitative labeling方法，从Xoo野生型菌株PXO99A、单基因缺失突变体Δfilp和ΔPXO02715以及双基因缺失突变体ΔfilpΔPXO_02715的比较分析中，鉴定了150多个受Filp和PXO_02715调控、差异表达的蛋白。本研究对其中6个推测涉及到c-di-GMP代谢的PXO_00476和PXO_04753、双组分系统(TCS)的PXO_04752和PXO_04157、受PhoPQ调控的PXO_01585和TonB类受体的PXO_01883的蛋白功能进行了分析。 在前期构建了以上6个基因缺失突变体的基础上，本研究构建了相关突变体的互补菌株，测定了它们的c-di-GMP代谢、毒性、运动性、胞外多糖(EPS)产生、生物膜形成和生长等表型，分析c-di-GMP代谢酶活性、鉴定了蛋白的细胞定位，采用酵母双杂交(Y2H)法分析了它们与Filp和PXO_02715的蛋白互作关系。结果表明，PXO_00476、PXO_04752和PXO_01883正调控Xoo的毒性，PXO_01585和PXO_04157负调控Xoo的毒性，而PXO_04753没有显著影响。与野生型相比，ΔPXO_00476、ΔPXO_04157、ΔPXO_01585和ΔPXO_01883的滑动性(sliding motility)增强，其余2个突变体减弱;所有突变体的游动性(swimming motility)无明显改变。与野生型相比，ΔPXO_00476、ΔPXO_04157、ΔPXO_04752和ΔPXO_04753的EPS产量增加，ΔPXO_00476、ΔPXO_01883和ΔPXO_04157生物膜形成增强，其它突变体没有显著变化。 采用高效液相色谱(UPLC)方法，检测了PXO_00476和PXO_00476D53A、PXO_04753和PXO_04753E192A的PDE活性。结果显示，PXO_00476具有PDE活性，PXO_04753的PDE活性相对较弱;但PXO_00476D53A和PXO_04753E192A没有降解c-di-GMP的活性。GFP融合表达和细胞定位分析发现，PXO_00476、PXO_01585、和PXO_04157表王见与Filp和PXO_02715相同的非极性定位，而PXO_04752和PXO_04753呈单极性定位。Y2H分析表明，所有6个蛋白均不与Filp和PXO_02715直接发生互作。因此，我们得出Filp和PXO_02715可能是通过间接影响这些蛋白的表达，从而调控了水稻白叶枯病菌c-di-GMP的水平和毒性的结论。