论文部分内容阅读
抑郁症、焦虑症和睡眠障碍等精神疾病严重危害了人类健康。传统中医药中合欢的干燥花序常用于解郁安神药物使用;现代药理学研究发现其具有抗抑郁、镇静催眠和抗肿瘤等活性。从中报道分离得到黄酮、生物碱、酚酸类和脂肪酸等32个化合物。 我们前期的活性筛选发现，合欢花的乙酸乙酯部位在323.33μg/mL浓度时对5-HT1A的激动率为68.9％。为揭示其活性成分，我们利用各种色谱方法（常压柱色谱:硅胶、葡聚糖凝胶LH-20;中压制备液相:MCI GEL CHP-20P、Rp C-18;HPLC等）以及波谱分析方法(MS、1D-、2D-NMR)从合欢花中共分离和鉴定了66个化合物，结构类型主要为酚酸、单萜、倍半萜、三萜、木脂和黄酮等，其中38个化合物为首次从合欢花中分离得到。 测试了其中24个化合物在1mM时浓度对5-HT1A、5-HT2C、、 MT1和MT2受体的激动作用。结果表明，clovan-2β，9α-diol(20)对四个受体均有激动作用，其激动率分别为132.38、42.78、64.85、69.01％;亚油酸(54)、丁香酚(42)、8-hydroxy-2，6-dimethyl-2E,6E-octadienoic acid(15)和3-吲哚甲醛(58)对四个受体显示出不同的激动作用。另外，以活性跟踪测试及利用LC-MSn-IT-TOF对活性部位进行分析，结果表明其活性成分为三萜皂苷，从中分离得到的合欢酸B对5-HT2C具有较好的激动活性，其EC50为13.78μM，其它活性成分正在研究中。论文还根据合欢花和合欢皮中化合物的结构类型及药理活性对其化学成分和药理活性进行了综述。 本研究丰富了合欢花的化学成分和结构类型，初步揭示了其抗抑郁和改善睡眠的活性成分，为其综合利用提供了初步的化学和药理学基础。 第一章合欢花化学成分及活性研究 合欢属Albizzia系豆科含羞草亚科植物，我国有16种，大部分产于南部和西南部，其中最常见的有合欢(Albizzia julibrissin Durazz.)，楹树(Albizziachinensis(Osb.) Merr.)和大叶合欢(Albizzia lebbeck(L.) Benth.)等。在医学古籍中，现代药理学研究和临床实验均表明:合欢花具有较好的抗抑郁和镇静催眠活性。为了进一步研究其抗抑郁和镇静催眠活性成分，本研究运用各种色谱方法（常压柱色谱:硅胶、葡聚糖凝胶LH-20;中压制备液相:MCI GEL CHP-20P、 Rp C-18;HPLC等）以及波谱分析方法(MS、1D-、2D-NMR)，从合欢花中共分离和鉴定了66个化合物，其中，化合物1-9,11-17,19-24,35-36,40-42,49-54,56,58-66为首次从该植物中分离得到。同时，测试了其中24个化合物在5-HT1A、5-HT2C、 MT1和MT2受体的激动活性，其有5个化合物(15、20、42、54、58)显示出一定激动作用。 苯酚类11个:香草醛(vanillin,1)、香草酸(vanillic acid,2)、对氯苯酚(4-chlorophenol,3)、对甲氧基苯甲酸(anisic acid,4)、水杨酸(salicylic acid,5)、4-O-乙基没食子酸(4-O-ethylgallic acid,6)、对羟基苯甲酸(p-hydroxy benzoicacid,7)、3-乙氧基-4-羟基苯甲酸(3-ethoxy-4-hydroxy-benzoic acid,8)、5-羟基苯甲醛(5-hydroxybenzaldehyde,9)、没食子酸(gallic acid,10)、原儿茶酸(protocatechoic acid,11)。 单萜类8个:8-O-formyl-2,6-dimethyl-2E,6Z-octadienoic acid(12)、8-hydroxy-2,6-dimethyl-2E,6Z-octadienoic acid(13)、8-O-formyl-2,6-dimethyl-2E,6E-octadienoic acid(14)、8-hydroxy-2,6-dimethyl-2E,6E-octadienoic acid(15)、(6S)-menthiafolic acid,16)、(6R)-menthiafolic acid(17)、(6S)-2-反式-2、6-二甲基-6-O-D-吡喃鸡纳糖基-2,7-辛二烯酸[(6S)-trans-2,6-dimethyl-6-O-D-quinovosyl-2,7-menthiafolic acid,18]、(6S)-2-反式-2,6-二甲基-6-O-β-D-吡喃木糖基-2,7-辛二烯酸[(6S)-2-trans-2,6-dimethyl-6-O-β-D-xylbinopyranosyloxy-2,7-menthiafolic acid,19]。 倍半萜5个:clovan-2β,9α-diol(20)、2β-O-formyl-clovan-9α-ol(21)、2β,9α-O-diformyl-clovan(22)、吐叶醇(vomifoliol,23)、(6S,9R)-roseoside(24)。 三萜类7个:剑叶沙酸内酯(machaerinic acid lactone,25)、 concinnosides B(26)、 concinnosides D(27)、 julibrosides A3(28)、齐墩果酸(oleanic acid,29)、山楂酸(maslinic acid,30)、熊果酸(ursolic acid,31)。 甾体类5个:豆甾醇(stigmasterol,32)、α-菠甾醇(α-spinasterol,33)、α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷(α-spinasterol-3-O-β-D-glucopyranoside,34)、(22E,24R)-5α,8α-epidioxy-ergosta-6,9,22-trien-3β-ol(35)、(22E,24R)-5α,8α-epidioxy-ergosta-6,22-dien-3β-ol)(36)。 木脂素类6个:桉脂素(eudesmin,37)、(+)-mediaresinol(38)、杜仲树脂酚[(-)-medioresinol,39]、(+)-lariciresinol9-stearate)(40)、2-羟基-3-甲氧基-5-（2-丙烯基）苯酚[2-hydroxy-3-methoxy-5-(2-propenyl) phenol,41]、丁香酚(eugenol,42)。 黄酮类7个:rhamnocitrin(43)、槲皮素(quercetin,44)、山萘酚(kaempferol,45)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(quercetin-3-O-α-L-rhamnopyside,46)、山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(kaempferol-3-O-α-L-rhamnopyside,47)、芦丁(rutin,48)、芒柄花素(formononetin,49)。 脂肪酸类6个:十八烷酸(stearic acid,50)、二十四烷酸(lignoceric acid,51)、十六烷酸(palmitic acid,52)、2，3-dihydroxypropyl hexadecanoate(53)、亚油酸(linoleic acid,54)、亚油酸甲酯(methyl linoleate,55)。 其它类11个:5，7-dihydroxy-coumarin(56)、4-羟基反式桂皮酸(4-hydroxy-trans-cinnamic acid,57)、3-吲哚甲醛(indole-3-carboxaldehyde,58)、三聚氰酸(cyanuric acid,59)、2-呋喃甲酸(2-furoic acid,60)、5-羟甲基糠醛(5-(hydroxymethyl)-2-furaldehyde,61)、2-氨基葡萄糖(2-amino-glucose,62)、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(2,6-di-tert-butyl-4-methylphenol,63)、乙基葡萄糖苷(ethyl glucoside,64)、乙基鼠李糖苷(ethyl rhamnosides,65)、尿苷(uridine,66)。 测试了24个化合物在1mM浓度时对5-HT1A、5-HT20 MT1和MT2受体的激动活性。结果表明:从合欢花首次分离得到的别丁香烷类倍半萜clovan-2β,9α-diol(20)对四个受体都具有激动作用，其激动率分别为132.38、42.78、64.85、69.01％，但是其甲酰化衍射物2β-O-formyl-clovan-9α-ol(21)、2β,9α-O-diformyl-clovan(22)都没有活性，表明羟基为活性必须基团;不饱和脂肪酸类化合物亚油酸(54)对5-HT1A受体具有一定的激动活性(75.74％);槲皮素(44)对MT1和MT2都具有激动作用，其激动率分别为35.32、36.40％，但槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷(46)仅在MT2上有一定的激动活性(36.48％)，对MT1没有激动活性，可能为空间效应或羟基被苷化导致的;丁香酚(42)对MT1受体的激动率为51.63％;单萜类化合物8-hydroxy-2，6-dimethyl-2E，6E-octadienoic acid(15)对MT2有激动作用，激动率为70.85％，肯能为其结构中羟基和羧基之间具有一定的距离所导致的;化合物物3-吲哚甲醛(58)为简单类的吲哚生物碱，对5-HT1A和MT2同时有一定的活性，激动率分别为25.74、53.01％。 还发现合欢花的一个提取部位对5-HT1A、5-HT2C、 MT1和MT2受体的具有较好激动活性，通过LC-MSn-IT-TOF分析确定活性部位主要为三萜皂苷类，从中分离得到的合欢酸B对5-HT2C受体具有较好的激动作用，其它活性成分正在进行研究中。 第二章合欢花和合欢皮化学成分及活性研究进展 本章对文献报道的合欢花中的32个黄酮类、脂肪酸类及挥发油，以及合欢皮中三萜皂苷、木脂素和黄酮类等109个化合物根据其化学结构特点进行了分类整理。总结了它们的镇静、催眠、减胖、抗菌和抗肿瘤等药理学作用。初步分析了合欢花及合欢皮在化学成分及药理活性方面的研究特点及差异。