VZV即早期蛋白ORF61降解活化的IRF3并阻断IRF3介导的天然免疫反应的分子机制研究

来源 :中国科学院研究生院 中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qf0909
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水痘-带状疱疹病毒(Varicella-zoster virus,VZv)ORF61基因编码一个分子量62-66kD的即早期磷酸化蛋白ORF61。研究发现,ORF61基因是病毒复制所必需的,在病毒感染早期能调控其它即早期和早期蛋白的表达。在结构与功能上与Ⅰ型单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus type1,HSV-1)编码的即早期蛋白ICP0同源,都含有C3HC4环指结构域。   本文通过双荧光素酶报告基因系统、免疫印迹、间接免疫荧光以及半定量RT-PCR等分子生物学和细胞生物学方法确定了VZV编码的ORF61蛋白能抑制宿主的IFN-β信号通路,并进一步阐释了具体的分子机制。本研究表明,ORF61抑制了由仙台病毒(Sendai virus,SeV)激活的IFN-β(interferon-beta)启动子活性;同时也抑制了分别由信号分子RIG-IN、IPS-1、TBK1、IKKi、及IRF-3/5D过量表达激活的IFN-β启动子活性。间接免疫荧光方法表明,ORF61能降解磷酸化的内源性IRF3,而不影响非活化的IRF3,蛋白酶体抑制剂MG132可解除ORF61对磷酸化IRF3的降解作用。进一步采用IRF3特异位点磷酸化抗体进行的免疫印迹实验同样证实了ORF61对磷酸化IRF3的降解作用。综上所述,ORF61借助于自身的E3泛素连接酶活性,通过泛素化-蛋白酶体途径降解磷酸化IRF3,从而干扰IFN-β信号通路,该机制的阐释将为进一步了解VZV逃逸宿主天然免疫的分子机制提供佐证。
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