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目的：了解某医院临床分离的对碳青霉烯类抗生素耐药的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药机制及其分子流行病学，为监控医院感染的流行和爆发，以及采取控制措施提供依据。
方法：收集山东省某医院2013年2月～2013年4月临床分离的对厄他培南耐药的11株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌，采用法国梅里埃VITEK2Compact系统对这15株菌进行细菌鉴定和药敏试验；改良霍奇(Hodge)试验初步筛查菌株是否产碳青酶烯酶；聚合酶链反应扩增菌株的碳青酶烯酶(A类、B类和D类)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶、氨基糖苷类钝化酶、整合酶和喹诺酮类等耐药基因，并对阳性扩增产物测序，以确定其基因型；脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法分析携带产肺炎克雷伯菌碳青酶烯酶(KPC)基因的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的同源性；病例资料采用回顾性分析方法。
结果：PCR结果显示，15株菌中共有12株携带肺炎克雷伯菌碳青酶烯酶(KPC)基因，其中肺炎克雷伯菌10株(10/11)，大肠埃希菌2(2/4)株，全部经测序确认是KPC-2型。药敏结果表明，10株产KPC的肺炎克雷伯菌除了对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素有比较高的敏感率外，对其他测试的抗生素几乎全部耐药。同样，2株KPC阳性的大肠埃希菌除了对亚胺培南、呋喃妥因、复方新诺明和氨基糖苷类抗生素全部敏感(100%，2/2)外，对其他测试的抗生素也呈现比较高的耐药率。15株菌改良Hodge试验全部阳性，敏感性比较高(100%)，但是特异性为80%(12/15)，存在一定的假阳性。10株KPC阳性的肺炎克雷伯菌携带超广谱β-内酰胺酶(TEM,SHV,CTX)、AmpC酶(DHA,CIT)、喹诺酮类耐药基因(oqxA,qnrB,qnrS)、氨基糖苷类钝化酶和I类整合酶的PCR扩增阳性率分别为100%(10/10)、20%(2/10)、90%(9/10)、10%(1/10)和30%(3/10)。脉冲场凝胶电泳(PFGE)将10株产KPC的肺炎克雷伯菌分为A、B、C和D，共4型；其中，A型7株，与多位点序列分型结果一致，属于ST789型；B型、C型和D型各1株，前两者均为ST437型，后者是ST258型；2株菌携带KPC基因的大肠埃希菌同属于ST131型。
结论：上述研究表明，同时携带KPC-2和其他多种耐药基因是该院临床分离的的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌呈现多重耐药的主要机制，而且该医院存在由携带KPC-2基因的肺炎克雷伯菌ST789型引起的医院感染的爆发流行，经检索为国内外首次报道。因此，要加强消毒隔离，防止进一步播散。
方法：收集山东省某医院2013年2月～2013年4月临床分离的对厄他培南耐药的11株肺炎克雷伯菌和4株大肠埃希菌，采用法国梅里埃VITEK2Compact系统对这15株菌进行细菌鉴定和药敏试验；改良霍奇(Hodge)试验初步筛查菌株是否产碳青酶烯酶；聚合酶链反应扩增菌株的碳青酶烯酶(A类、B类和D类)、超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶、氨基糖苷类钝化酶、整合酶和喹诺酮类等耐药基因，并对阳性扩增产物测序，以确定其基因型；脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)方法分析携带产肺炎克雷伯菌碳青酶烯酶(KPC)基因的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的同源性；病例资料采用回顾性分析方法。
结果：PCR结果显示，15株菌中共有12株携带肺炎克雷伯菌碳青酶烯酶(KPC)基因，其中肺炎克雷伯菌10株(10/11)，大肠埃希菌2(2/4)株，全部经测序确认是KPC-2型。药敏结果表明，10株产KPC的肺炎克雷伯菌除了对阿米卡星、庆大霉素和妥布霉素有比较高的敏感率外，对其他测试的抗生素几乎全部耐药。同样，2株KPC阳性的大肠埃希菌除了对亚胺培南、呋喃妥因、复方新诺明和氨基糖苷类抗生素全部敏感(100%，2/2)外，对其他测试的抗生素也呈现比较高的耐药率。15株菌改良Hodge试验全部阳性，敏感性比较高(100%)，但是特异性为80%(12/15)，存在一定的假阳性。10株KPC阳性的肺炎克雷伯菌携带超广谱β-内酰胺酶(TEM,SHV,CTX)、AmpC酶(DHA,CIT)、喹诺酮类耐药基因(oqxA,qnrB,qnrS)、氨基糖苷类钝化酶和I类整合酶的PCR扩增阳性率分别为100%(10/10)、20%(2/10)、90%(9/10)、10%(1/10)和30%(3/10)。脉冲场凝胶电泳(PFGE)将10株产KPC的肺炎克雷伯菌分为A、B、C和D，共4型；其中，A型7株，与多位点序列分型结果一致，属于ST789型；B型、C型和D型各1株，前两者均为ST437型，后者是ST258型；2株菌携带KPC基因的大肠埃希菌同属于ST131型。
结论：上述研究表明，同时携带KPC-2和其他多种耐药基因是该院临床分离的的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌呈现多重耐药的主要机制，而且该医院存在由携带KPC-2基因的肺炎克雷伯菌ST789型引起的医院感染的爆发流行，经检索为国内外首次报道。因此，要加强消毒隔离，防止进一步播散。