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目的：本实验在体外成功原代培养人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)的基础上,将含不同浓度淫羊藿苷(icariin,ICA)的矿化诱导培养液与其作用,通过检测其增殖,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)等骨相关特征性指标,以期明确淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响。方法：1.采用胰酶消化玻片覆盖组织块法体外原代培养人牙周膜细胞,相差倒置显微镜观察其形态学特征,采用每日细胞计数法绘制细胞生长曲线；2.波形丝蛋白、角蛋白免疫细胞化学染色鉴定原代培养的人牙周膜细胞来源；3.在矿化诱导条件下培养人牙周膜细胞21d,行茜素红染色,以是否形成钙化结节评价其是否具有骨向分化能力；4.在矿化诱导条件下将浓度为10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml、0μg/ml的淫羊藿苷与人牙周膜细胞作用24h、48h、72h,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)评价淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖的影响；5.在矿化诱导条件下将浓度为10μg/ml、1μg/ml、0.1μg/ml、0.01μg/ml、0.001μg/ml、0μg/ml的淫羊藿苷与人牙周膜细胞作用72h,通过检测ALP活性,Elisa法检查BSP、OCN的表达水平,评价其对人牙周膜细胞骨向分化的影响。结果：1.胰酶消化玻片覆盖组织块法可成功原代培养人牙周膜细胞,生长曲线可见,接种后24-48h,细胞数目有所减少,第3d细胞开始增殖,逐渐进入指数增殖期,接种后第7d,细胞数目达到最大值,第8d开始,细胞进入平台期。整个生长曲线呈现“S”形。按公式计算,得出细胞倍增时间约为90h。2.原代培养人牙周膜细胞免疫细胞化学染色,波形丝蛋白染色阳性,表现为胞质棕黄色着色；角蛋白染色阴性,未见着色,说明是中胚层来源细胞。3.矿化诱导培养第14d时,观察到细胞群中出现灰白色结节,随时间增长逐渐增大增多。第21d时结束培养行茜素红染色后可见,矿化诱导培养组形成多处红染矿化结节,而对照组仅可见到极少数红染矿化结节,原代培养的人牙周膜细胞可在矿化诱导条件下骨向分化：4.淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖的影响：淫羊藿苷作用24h时,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05)。作用48h时,1-0.001μg/ml组可明显增强人牙周膜细胞增殖能力(P<0.05),10μg/ml组OD值较对照组小,但差异无统计学意义(P>0.05)。作用72h时,0.1-0.001μg/ml组可促进人牙周膜细胞增殖(P<0.05),10μg/ml组与对照组相比抑制了牙周膜增殖(P<0.05)；5.淫羊藿苷对人牙周膜细胞碱性磷酸酶(ALP)活性的影响：淫羊藿苷在矿化诱导条件下与人牙周膜细胞作用72h时,发现1-0.001μg/ml组可促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶(ALP)活性(P<0.05),而10μg/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)；6.淫羊藿苷对人牙周膜细胞骨涎蛋白(BSP)表达水平的影响：淫羊藿苷与人牙周膜细胞在矿化诱导条件下作用72h后,0.1～0.001μg/ml组的BSP表达水平均较对照组显著增加(P<0.05)。1 u g/ml与10μg/ml组与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。7.淫羊藿苷对人牙周膜细胞骨钙素(OCN)表达水平的影响：人牙周膜细胞在矿化诱导条件下与不同浓度淫羊藿苷作用72h后,1～0.01μg/ml组的OCN表达水平均较对照组显著增加(P<0.05),0.001μg/ml组的OCN表达水平较对照组高,但无统计学意义(P>0.05),10μg/ml组OCN表达水平较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1.胰酶消化玻片覆盖组织块法可成功原代培养人牙周膜细胞,培养周期短、成功率高,其来源可靠,细胞生长状态良好；2.人牙周膜细胞中具有可骨向分化的细胞群；3.一定浓度的淫羊藿苷可促进人牙周膜细胞增殖和骨向分化。