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本文将冻融的新生小鼠卵巢和奶牛卵巢皮质，经同种或异种异位移植到受体鼠肾被膜下，研究原始卵泡在移植后能否重新启动生长发育，体外成熟(in vitro maturation，IVM)能否获得成熟卵母细胞、体外成熟卵母细胞能否进行体外受精(in vitrofertilization，IVF)，以及受精后的胚胎能否完成体外或体内发育等。探讨通过“卵巢移植”+“体外培养”方式从小鼠或奶牛原始卵泡获得卵母细胞的可能性。
试验一：研究了1日龄小鼠冻融卵巢同种异体异位移植后，其原始卵泡重新启动生长发育的能力。分离1日龄B6C2 F<,1>小鼠卵巢，用程序冷冻仪冷冻后置入液氮中保存，1周～6个月后解冻并移植到卵巢摘除的8～12 周龄B6C2 F<,1>受体小鼠肾被膜下，移植至少14 d。每侧移植2枚卵巢的40只受体小鼠中，卵巢回收率为45.00％(72/160)，而每侧移植1枚卵巢的20只受体小鼠，回收率为82.50％(33/40)。选择体外自然生长的F<,1>雌鼠，分别对1 d、10 d、12 d、14 d、19 d的F<,1>鼠卵巢进行切片观察，发现在14日龄时，卵巢上的卵泡开始出现微小的腔，从14日龄开始，卵巢上有腔卵泡数目逐渐增多，19日龄F<,1>鼠卵巢上有腔卵泡数目明显多于14 d的；对移植14 d、19 d、21 d后的受体卵巢切片，也观察到在14 d时出现有腔卵泡，到19日龄时明显增多，证明移植的1日龄小鼠卵巢在受体的肾脏中能够生长发育，卵泡发育情况基本与体外自然生长的小鼠一致。
对卵巢移植19 d的受体小鼠用孕马血清促性腺激素(pregnant mar serumgonadotropin，PMSG)处理后，从移植卵巢上发育成熟卵泡采集的卵母细胞，在MEMα培养基中培养16～17 h，有40.90％(n=423)的卵母细胞发生生发泡破裂(germinalvesicle breakdown，GVBD)，其中89.02％(n=154)发生GVBD的卵母细胞发育到第二次减数分裂中期(metaphase Ⅱ，MⅡ)。将剩余的卵母细胞继续培养到20～21 h，总共有50.83％(n=215)的卵母细胞发生GVBD，但仅21.40％(n=46)发生GVBD的卵母细胞能够发育到MⅡ期。把成熟的卵母细胞经IVF后，体外成熟培养16-17 h的卵母细胞中有70.91％(n=165)经过IVF后能到发育2-细胞阶段，2-细胞胚胎有38.46％(n=45)发育到囊胚阶段；而成熟培养20～21 h的卵母细胞相应为42.80％(n=250)和22.43％(n=24)。移植卵巢组受精后的胚胎通过输卵管伞口进行胚胎移植，原核期胚胎移植的未见有仔鼠出生，2-细胞胚胎移植的共生出20只小鼠。
上述结果提示，新生小鼠卵巢经过冷冻．解冻并经异体异位移植后，其原始卵泡能够重新启动生长，卵泡发育与正常雌鼠卵巢上的相同，源于移植卵巢的卵母细胞能够在体外成熟并能体外受精，且受精后形成的胚胎能够在体外发育至囊胚，胚胎移植后产出活的仔鼠。
试验二：研究了冷冻保存的奶牛卵巢皮质切片，解冻后异种异位移植到裸鼠肾被膜下以后，其原始卵泡重新启动生长发育的能力。从屠宰场采集奶牛新鲜卵巢后，机械分离去除髓质和脂肪等组织，切成2 mm×2 mm×1 mm小块，用1.5 M DMSO作冷冻保护剂，用程序冷冻仪冷冻后置入液氮中保存，保存3～4个月后解冻，将卵巢皮质移植到卵巢摘除的3周龄裸鼠肾脏被膜下。50只受体裸鼠每侧肾囊中移植1枚卵巢，移植25 d卵巢回收率为79.00％(79/100)。为了解裸鼠卵巢皮质移植后动情周期和卵巢分泌E<,2>功能恢复情况，取30只裸鼠分正常对照、去势对照和卵巢移植组，术后观察阴道涂片变化，移植30 d采血测定血清中E<,2>的水平，结果正常对照组动情周期正常，去势对照组小鼠的阴道涂片在7 d左右失去正常的周期变化，卵巢移植组在失去正常周期变化后，于10.75 d重新出现动情周期，动情周期恢复率为80.0％；卵巢移植组动情期小鼠的血清E<,2>水平与正常对照组无显著差异(38.67 pg/ml vs 28.89pg/ml)，但显著高于去势对照组的5.96 pg/ml，提示冷冻奶牛卵巢皮质异种异位移植能够成活，重建异位的下丘脑-垂体-卵巢功能轴，恢复卵巢分泌E<,2>功能和动情周期。
对卵巢皮质移植25 d的受体裸鼠用PMSG 15 IU/只处理后，从移植卵巢组织上发育成熟卵泡采集的卵母细胞，在TCM-199培养基中培养22～24 h，有53.50％(n=226)的卵母细胞发生GVBD，其中90.08％(n=109)的卵母细胞发育到MⅡ期。体外成熟的卵母细胞经IVF后，有60.2％(n=216)经过IVF后能到发育2-细胞阶段，2-细胞胚胎有9.20％(n=12)发育到囊胚阶段。
上述结果提示，奶牛卵巢皮质小块经冷冻-解冻，异种异位移植后，其内的原始卵泡能够重新启动生长发育，发育后的卵泡卵母细胞能够在体外培养成熟。这些结果意味着原始卵泡或卵巢冷冻．移植技术，有可能充分利用雌性生殖细胞，用于濒危动物保种、建立动物基因库和人类辅助生殖等。