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子宫内膜异位症是指具有生长功能的子宫内膜出现在子宫腔被覆粘膜以外的部位而发生的病变。它是妇科的常见病、多发病，近年有不断增长的趋势，常引起痛经、性交痛、不孕等，病变广泛，形态多样，且具有转移、浸润和复发等恶性生物学特性。目前临床对子宫内膜异位症的治疗具有复发性高、副作用大的特点，究其原因在于对子宫内膜异位症的发病机制尚未完全阐明导致治疗的针对性不强。
本课题着重探讨桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的理论基础，并通过建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法，观测桂苓消异方药物血清对体外培养的基质细胞形态以及其分泌MMP-9的影响。由于已经证实了桂苓消异方对体外培养的子宫内膜异位症患者的子宫内膜基质细胞分泌IL-6、IL-8具有抑制作用，本试验将在前期工作基础上进一步研究IL-6、IL-8与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9是否存在相关性，以探讨IL-6、IL-8在子宫内膜异位症发生过程中的作用及桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的作用机理。
一、桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的理论探讨
子宫内膜异位症依其主要症状及体征属中医“痛经”，“癥瘕”，“不孕”的范畴。
因肾主生殖的功能异常，加之经期、产后生活不节等，导致冲任损伤及胞宫的藏泻功能异常而发生本症。肾虚多为发病之根本，血瘀是重要的致病因素和病理表现，故治疗当从温肾化瘀着手。
桂枝茯苓丸出自张仲景的《金匮要略》，为治疗胎漏之剂，本意用于妊娠之后癥积害胎，胎元不固者。若用于临床消癥散积，有病重药轻之嫌，一则须增强活血化瘀药力，二则须结合辨证加减运用。导师在原方基础上去甘缓之蜜，加仙灵脾以温肾阳、血竭粉以增强祛瘀散结的力量，组成桂苓消异方，用于临床取得了较好疗效。本课题用桂苓消异方进行子宫内膜异位症的体外实验研究，为桂苓消异方的临床用药提供理论依据。
二、初步建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法
收集2008年10月至2009年4月在扬州市第一人民医院和中医院妇产科接受手术治疗子宫内膜异位症或子宫肌瘤的患者的在位子宫内膜，分离培养基质细胞并传代，利用显微镜观察细胞生长增殖情况，免疫组化法鉴定细胞纯度。
结果显示，结合采用酶消化法、筛网分离法、离心分离法及差时贴壁法，成功分离培养出人子宫内膜基质细胞，成功率为88.89[％]。细胞可传代4-5 代，成活4-5周。证实在本实验条件下，体外分离纯化的子宫内膜基质细胞具备良好的增殖能力。内异症与非内异症子宫内膜均可分离培养成功(P＞0.05)。内膜基质细胞的取材时期对细胞成活率以及增殖能力有影响(P＜0.05)。子宫内膜基质细胞的成功分离培养为揭示子宫内膜异位症的发病机制以及药效学研究建立了良好的实验平台。
三、桂苓消异方对子宫内膜基质细胞分泌MMP-9的影响及IL-6、IL-8与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9的相关性研究
制备桂苓消异方含药血清，用其干预人子宫内膜基质细胞，倒置显微镜下观察细胞的形态变化，并收集24h、48h、72h 三个时间段的细胞培养上清液，用酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP-9。
配置含不同浓度IL-6、IL-8的培养液，用其培养人子宫内膜基质细胞，倒置显微镜下观察细胞的形态变化，并收集24h 时间段的细胞培养上清液，用酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP-9。
通过定量检测，证明了桂苓消异方药物血清能够降低子宫内膜基质细胞分泌MMP-9(P＜0.01)，并随着其浓度的增高和作用时间的延长而抑制作用越明显；IL-6能刺激子宫内膜基质细胞分泌MMP-9(P＜0.01)，且呈浓度依赖性。这提示IL-6与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9存在相关性，桂苓消异方既可直接抑制子宫内膜基质细胞分泌MMP-9，又可通过抑制IL-6的分泌进而间接抑制MMP-9的分泌，从而控制子宫内膜异位的发生发展。本实验显示IL-8对子宫内膜基质细胞产生MMP-9无显著影响(P＞0.05)，提示IL-8对子宫内膜的影响不是通过提高MMP-9水平而促进异位内膜种植的。
本课题着重探讨桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的理论基础，并通过建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法，观测桂苓消异方药物血清对体外培养的基质细胞形态以及其分泌MMP-9的影响。由于已经证实了桂苓消异方对体外培养的子宫内膜异位症患者的子宫内膜基质细胞分泌IL-6、IL-8具有抑制作用，本试验将在前期工作基础上进一步研究IL-6、IL-8与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9是否存在相关性，以探讨IL-6、IL-8在子宫内膜异位症发生过程中的作用及桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的作用机理。
一、桂苓消异方治疗子宫内膜异位症的理论探讨
子宫内膜异位症依其主要症状及体征属中医“痛经”，“癥瘕”，“不孕”的范畴。
因肾主生殖的功能异常，加之经期、产后生活不节等，导致冲任损伤及胞宫的藏泻功能异常而发生本症。肾虚多为发病之根本，血瘀是重要的致病因素和病理表现，故治疗当从温肾化瘀着手。
桂枝茯苓丸出自张仲景的《金匮要略》，为治疗胎漏之剂，本意用于妊娠之后癥积害胎，胎元不固者。若用于临床消癥散积，有病重药轻之嫌，一则须增强活血化瘀药力，二则须结合辨证加减运用。导师在原方基础上去甘缓之蜜，加仙灵脾以温肾阳、血竭粉以增强祛瘀散结的力量，组成桂苓消异方，用于临床取得了较好疗效。本课题用桂苓消异方进行子宫内膜异位症的体外实验研究，为桂苓消异方的临床用药提供理论依据。
二、初步建立人子宫内膜基质细胞的体外纯化培养方法
收集2008年10月至2009年4月在扬州市第一人民医院和中医院妇产科接受手术治疗子宫内膜异位症或子宫肌瘤的患者的在位子宫内膜，分离培养基质细胞并传代，利用显微镜观察细胞生长增殖情况，免疫组化法鉴定细胞纯度。
结果显示，结合采用酶消化法、筛网分离法、离心分离法及差时贴壁法，成功分离培养出人子宫内膜基质细胞，成功率为88.89[％]。细胞可传代4-5 代，成活4-5周。证实在本实验条件下，体外分离纯化的子宫内膜基质细胞具备良好的增殖能力。内异症与非内异症子宫内膜均可分离培养成功(P＞0.05)。内膜基质细胞的取材时期对细胞成活率以及增殖能力有影响(P＜0.05)。子宫内膜基质细胞的成功分离培养为揭示子宫内膜异位症的发病机制以及药效学研究建立了良好的实验平台。
三、桂苓消异方对子宫内膜基质细胞分泌MMP-9的影响及IL-6、IL-8与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9的相关性研究
制备桂苓消异方含药血清，用其干预人子宫内膜基质细胞，倒置显微镜下观察细胞的形态变化，并收集24h、48h、72h 三个时间段的细胞培养上清液，用酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP-9。
配置含不同浓度IL-6、IL-8的培养液，用其培养人子宫内膜基质细胞，倒置显微镜下观察细胞的形态变化，并收集24h 时间段的细胞培养上清液，用酶联免疫吸附试验法(ELISA)定量检测其分泌的MMP-9。
通过定量检测，证明了桂苓消异方药物血清能够降低子宫内膜基质细胞分泌MMP-9(P＜0.01)，并随着其浓度的增高和作用时间的延长而抑制作用越明显；IL-6能刺激子宫内膜基质细胞分泌MMP-9(P＜0.01)，且呈浓度依赖性。这提示IL-6与子宫内膜基质细胞分泌MMP-9存在相关性，桂苓消异方既可直接抑制子宫内膜基质细胞分泌MMP-9，又可通过抑制IL-6的分泌进而间接抑制MMP-9的分泌，从而控制子宫内膜异位的发生发展。本实验显示IL-8对子宫内膜基质细胞产生MMP-9无显著影响(P＞0.05)，提示IL-8对子宫内膜的影响不是通过提高MMP-9水平而促进异位内膜种植的。